非小细胞肺癌组织中VEGF—C表达与淋巴转移的联系

　　非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）是我国发病率最高的呼吸系统恶性肿瘤之一，由于其预后差，死亡率高，严重威胁人们的生命和健康。本文通过测定65例NSCLC组织中VEGF-C的表达情况，探讨VEGF-C与NSCLC组织淋巴管生成及淋巴转移的关系。
　　1 资料与方法
　　1.1 一般资料
　　65例NSCLC标本均由本院胸外科2009年1月～2012年11月送检，术前患者均未作肿瘤相关治疗，男性41例，女性24例，年龄36～78岁，中位年龄57岁。所有标本中，病理诊断为腺癌22例，鳞癌32例，腺鳞癌11例；其中高分化27例，中低分化38例，并对清理的淋巴结行病理活检，以活检阳性作为淋巴结转移的标准，31例有淋巴结转移，34例无淋巴结转移。
　　1.2 方法
　　1.2.1 免疫组织化学染色 对送检标本经甲醛固定、脱水后石蜡包埋，制成厚为4 μm的连续切片，对切片进行免疫组织化学染色，用SP法测定肿瘤组织中VEGF-C的表达水平，兔抗人VEGF-C多克隆抗体、VEGF-C受体3（VEGFR-3）抗体及鼠抗人CD31抗体均购自北京金桥公司，SP法染色严格按照操作说明书进行，用已知阳性切片作为阳性对照，磷酸缓冲液代替一抗作阴性对照。
　　1.2.2 VEGF-C结果判断 VEGF-C蛋白在NSCLC肿瘤细胞质中表现为棕黄色颗粒，根据细胞质染色的深浅评为0～3分，0、1、2、3分的染色情况分别为无色、淡黄、棕黄、棕褐（或黑色）。另外根据阳性细胞在高倍视野中的比例多少评为0～4分：0分，所占比例为0；1分，所占比例为1%～10%；2分，所占比例为11%～50%；3分，所占比例为50%～75%；4分，所占比例>75%，把细胞质染色评分与阳性细胞比例评分相乘，积<3分为阴性，积于3～9分为阳性[3]。
　　1.2.3 微淋巴管与微血管计数 首先用低倍镜寻找微淋巴管和微血管聚集区，然后选择5个血管和淋巴管最多的视野在200倍镜下计数，求5个视野的平均值作为该组织微淋巴管和微血管数目。视野内肿瘤组织中如出现内皮细胞，即视为微淋巴管，微血管计数采用CD31标记免疫组织化学法[4]。
　　1.3 统计学方法
　　采用SPSS 19.0软件对数据进行分析，计量资料以x±s表示，采用t检验，计数资料采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
　　2 结果
　　2.1 VEGF-C的阳性表达情况
　　有淋巴结转移肿瘤组织VEGF-C的阳性表达率高于无淋巴结转移肿瘤组织（χ2=15.461，P<0.05）；不同分化程度和不同病理类型的NSCLC组织中VEGF-C的阳性表达率差异无统计学意义（P>0.05）（表1）。
　　2.2 微淋巴管与微血管计数情况的比较
　　VEGF-C阳性表达的NSCLC组织微淋巴管计数高于VEGF-C阴性NSCLC组织（t=22.080，P<0.05），有淋巴结转移NSCLC组织微淋巴管与微血管计数高于无淋巴结转移NSCLC组织（t分别为37.312、20.847，P<0.05）（表2）。
　　3 讨论
　　VEGF-C是人类最早发现的促淋巴管生成因子[5]，NSCLC肿瘤细胞和周围基质细胞均可分泌VEGF-C，特异性地作用于VEGFR-3，激活ERK/MEK和Akt信号通道，并发生一系列生物化学反应，延长淋巴管内皮细胞的存活期，促进淋巴细胞和内皮细胞的分化与增殖，明显增加淋巴细胞数目并向远处转移。内皮细胞增多形成大量新生的淋巴管，致肿瘤组织中淋巴管数目明显增多，为肿瘤的淋巴转移创造条件，新生淋巴管通透性好，有利于肿瘤细胞的游离、转移，从而起促进肿瘤淋巴转移的作用[6]。吕坤聚等[7]的研究显示NSCLC组织中VEGF-C的表达与微血管和微淋巴管密度呈显著正相关，并且在有淋巴转移的NSCLC患者中，VEGF-C阳性表达率达68.6%，而无淋巴结转移患者阳性表达率仅为31.0%（P<0.05），提示NSCLC肿瘤组织中VEGF-C调控微血管的生成与淋巴转移存在密切的联系。左涛等[8]通过对比VEGF-C在肿瘤组织和正常肺组织中的表达、有无淋巴结转移的肿瘤组织中的表达，证实VEGF-C参与肺癌发生和发展的过程。
　本研究显示，VEGF-C在有淋巴结转移的NSCLC肿瘤组织的阳性表达率高，且VEGF-C阳性表达情况在不同分化程度和不同组织类型的NSCLC组织中差异无统计学意义，提示VEGF-C阳性表达与肿瘤的淋巴转移密切相关。有淋巴结转移的NSCLC组织中微血管和微淋巴管密度高，同时VEGF-C表达阳性的NSCLC组织中微淋巴管的密度高，提示NSCLC组织中VEGF-C诱导并促进微血管和微淋巴管的形成而导致淋巴转移。另外，在VEGF-C阳性表达的NSCLC组织与阴性表达的组织相比，微血管密度差异无统计学意义，提示VEGF-C阳性表达诱导微血管增生作用较小，进一步证明VEGF-C主要是通过调节肿瘤组织中微淋巴管的形成而促进NSCLC的淋巴转移。
　　[参考文献]
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　　[3] 赵迎春，李勇，朱永云，等.VEGF-C、VEGF-D在乳腺癌中的表达及其与淋巴结转移及预后的关系[J].实用癌症杂志，2012，27（3）：236-240.
　　[4] 郑民，梁岳培，王洋.非小细胞肺癌组织中VEGF、PEDF的表达变化及意义[J].山东医药，2011，51（18）：53-54.
　　[5] 张善兰，钱晓萍，刘宝瑞.VEGF-C与肿瘤淋巴管生成和淋巴结转移关系研究进展[J].现代肿瘤医学，2012，20（6）：1274-1277.
　　[6] Alitalo A，Detmar ction of tumor cells and lymphatic vessels in cancer progression[J].Oncogene，2012，31（42）：4499-4508.
　　[7] 吕坤聚，赵统，蒋悍东.NF-κB、VEGF在非小细胞肺癌中的表达及其与肿瘤血管形成的研究[J].中国组织化学与细胞化学杂志，2013，22（1）：59-62.
　　[8] 左涛，黄杰，谢颂平，等.VEGF-C和E-cadherin在非小细胞肺癌中的表达及意义[J].肿瘤防治研究，2013，40（1）：72-75.