不同浓度依托咪酯诱导人肝癌HepG2细胞体外凋亡的

　依托咪酯可以直接抑制HL-60的细胞活性，并且诱发该细胞的凋亡，也有相关文献报道依托咪酯对鼠肝线粒体能量代谢有影响，还有对肝脏缺血-再灌注损伤的保护均有作用[1-4]，那么依托咪酯是否也会直接诱发人肝癌HepG2细胞的凋亡呢？我们提出了该研究的假设。本文设计不同浓度的依托咪酯是否具有直接诱导该细胞凋亡的作用，2.1.1 细胞冻存 取1mL的胰酶消化2min后，将对数生长期的细胞从培养瓶表面贴壁冲洗下去，并悬浮于3mL的培养液中，用1000rpm离心5min，去上清液。将人肝癌HepG2细胞悬浮于1mL的冻存液中，调整细胞浓度至106/mL，每个冻存管中加入1mL的细胞冻存液，放置-20℃冰箱内保存2h，然后置于-80℃冰箱过夜。
　　2.1.2 细胞复苏 将冻存备用的细胞，放入37℃的水浴箱内融化复苏。
　　2.1.3 细胞培养 将人肝癌HepG2细胞放置于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养，每3天传代培养1次，细胞贴壁达到70%时，以0.25%胰酶消化，使细胞全部都浸于溶液，倒置显微镜下观察，细胞变圆后，但尚未漂起时加入5mL培养液终止消化，然后分到另两个培养瓶中，加入新鲜培养基后再放置于37℃、5%CO2细胞培养箱中继续培养，取对数生长期细胞。
　　2.1.4 细胞传代 采用倒置显微镜观察细胞贴壁生长状况，当生长至80%以上时，用0.25%胰酶消化进行传代，并置于37℃、5%CO2细胞培养箱中继续培养。
　4 讨论
　　依托咪酯为临床常用的一种麻醉剂，在静脉麻醉过程中只需一次给药就可以获得很好的效果，但是依托咪酯所产生的毒性作用也是麻醉剂中独有的，它可以促进免疫细胞的凋亡。许多国内学者研究依托咪酯诱导肿瘤细胞凋亡作用，从而分析依托咪酯的药理学和临床治疗的意义。有研究表明[5-8]，小剂量依托咪酯对人急性髓性细胞白血病细胞具有一定的抑制作用。
　　为探讨不同浓度的依托咪酯是否具有直接诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的作用而进行该试验。采用小剂量和大剂量的依托咪酯做细胞凋亡分析，综合相关文献，参照依托咪酯对外周血单个核细胞凋亡影响的试验方法及药物剂量规格[9-12]，观察该细胞正常时细胞凋亡情况，以及分别给予小剂量0.5μg/mL，5μg/mL的依托咪酯、大剂量50μg/mL后12h、2h、48h依托咪酯时对人肝癌HepG2细胞凋亡的情况。实验结果证明依托咪酯诱导人肝癌细胞株HepG2细胞的凋亡具有一定的浓度-效应与时间-效应的关系，为依托咪酯开辟临床治疗的新途径。
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