中药罗汉果中9种有机氯农药残留的测定

作者：关泽明，郭晓玲2，梁汉明，罗瑜

【摘要】 目的 建立中药罗汉果中六六六、滴滴涕、五氯硝基苯3类有机氯农药残留量的测定方法。方法 参照《 中国 药典》方法提取样品，硫酸磺化后，采用气相色谱法：色谱柱为cpsil 24 cb石英毛细管柱，初始温度100 ℃，保持5 min，以5 ℃/min升至220 ℃保持10 min，以8 ℃/min升至250 ℃保持27 min; 63ni 电子 捕获检测器检测，外标法 计算 含量。结果 市售8批次罗汉果样品中均有不同程度的农药残留。结论 本方法对9种有机氯均能达到基线分离，可用于罗汉果中有机氯农药残留量的测定。

【关键词】 罗汉果;有机氯农药残留;气相色谱法

　　(ng pharmaceutical .,yunfu,guangdong 527100,china; central laboratory,guangdong pharmaceutical college,guangzhou,guangdong 510006，china)abstract:objective to establish a method for determining 3 kinds of residues of organic chlorine pesticides，including bhc，ddt，pcnb in siraitiae s the extracts were prepared according to chinese pharmacopoeia and analyzed by gas chromatography with cpsil 24 cb quartz capillary column and electronic capture eetector(63ni ecd)，and the contents of 9 organic chlorine pesticides were calculated by external standard. results the organic chlorine pesticides in siraitiae fructus were determined and found in all samples collected. conclusions separation of the main peaks was achieved. the method can be used to determine organic chlorine pesticides in siraitiae fructus.

　　key words:siraitiae fructus; organic chlorine pesticides; gas chromatography

　　罗汉果(siraitiae fructus)又名光果木鳖、假苦瓜，为葫芦科植物罗汉果的成熟果实。具有清肺止咳、润肠通便作用，临床上可用于 治疗 急慢性支气管炎和急慢性扁桃体炎、咽喉炎、急性胃炎、血燥便秘、哮喘、百日咳等疾病。主产于广西、广东、江西等地[1-2]。本实验建立了用毛细管柱气相色谱外标法对罗汉果中有机氯农药残留量进行测定的方法,为罗汉果的安全使用提供 科学 的质量控制依据。

　 　1 仪器与试剂

　　美国varian cp3800气相色谱仪，配有combipal自动进样器、cpsil 24 cb弹性石英毛细管柱(50%苯基，50%二甲基硅氧烷，30 m×0.32 mm×0.25 mm)、63ni电子捕获检测器(ecd)、galaxie色谱工作站。

　　二氯甲烷、丙酮、石油醚(60～90 ℃)，均重蒸;实验用水为双蒸水;浓硫酸等化学试剂均为分析纯。

　　农药对照品包括六六六的4种异构体：甲体六六六(αbhc)、丙体六六六(γbhc)、丁体六六六(δbhc)(质量浓度均为100 mg/l)，乙体六六六(βbhc)(质量浓度为50 mg/l);滴滴涕的4种异构体：pp′dde、op′ddt(质量浓度均为50 mg/l)，pp′ddd、pp′ddt(质量浓度均为100 mg/l;以上均由国家标准物质中心提供;五氯硝基苯(pcnb)(质量浓度为100 mg/l，由农业部环境保护科研监测所提供)。

　　收集市售罗汉果8批次，经广州市药品检验所七分所陈继慈副主任药师鉴定为葫芦科植物罗汉果siraita grosvenorii(swingle)y ex et 的成熟果实。来源及产地见表1。表1 药材来源及产地

　　 2 实验方法

　　2.1 样品溶液的制备[3]197

　　先将罗汉果样品于60 ℃干燥4 h，粉碎成细粉(过80目筛)，取本品2 g，精密称定，置100 ml具塞锥形瓶中，加水20 ml浸泡过夜。精密加丙酮40 ml，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用丙酮补足减失的重量。再加nacl约6 g，精密加二氯甲烷30 ml，称定重量，超声处理15 min，再称定重量，用二氯甲烷补足减失的重量，静置使分层。将有机相迅速移入装有5 g无水naso4的100 ml具塞锥形瓶中，放置4 h。精密量取35 ml，于40 ℃水浴上减压浓缩至近干，加5 ml石油醚如前法反复操作3次至二氯甲烷及丙酮除净，用石油醚溶解并转移至10 ml具塞刻度离心管中，加石油醚精密稀释至5 ml，小心加入浓h2so4溶液1 ml，振摇1 min，离心(3 000 r·min-1 )10 min，精密量取上清液2 ml，置具刻度的试管中，40 ℃下用氮气吹至溶液浓缩至约0.5 ml，加石油醚精密稀释至1 ml，作为样品溶液备用。

　　2.2 色谱条件与系统适应性试验

　　色谱柱：cpsil 24 cb(30 m×0.25 mm×0.25 μm，美国varian公司)弹性石英毛细管柱，进样口温度260 ℃，检测器温度300 ℃，柱升温程序为初始温度100 ℃，保持5 min，以5 ℃/min升至220 ℃保持10 min，以8 ℃/min升至250 ℃保持27 min;载气为高纯氮(质量分数>99.999%)， 2 μl不分流进样，外标法定量。将单一农药对照品液依法进样，各农药组分的出峰顺序依次为αbhc、pcnb、γbhc、βbhc、δbhc、pp′dde、op′ddt、pp′ddd、pp′ ddt。取样品溶液2 μl，依法测定，理论塔板数按αbhc对照品色谱峰计算不低于1×106，各农药组分色谱峰与其相邻色谱峰之间分离度均大于1.5。

　　2.3 方法学考察

　　2.3.1 标准曲线 精密移取αbhc、γbhc、δbhc、pp′ddt、pp′ddd、pcnb对照品溶液各0.5 ml，βbhc、pp′ dde、op′ ddt各1.0 ml，分别置10 ml量瓶中，加石油醚配成5 mg/l 的对照品储备液。精密移取5 mg/l对照品储备液各适量，用石油醚配制成5、10、25、50、100、250 μg/l的混合对照品溶液。分别取上述混合对照品溶液各2 μl进样，以峰高为纵坐标，质量浓度(μg/l)为横坐标，计算回归方程(见表2)。结果表明，各被测组分在5～250 μg/l质量浓度范围内与峰高均呈良好的线性关系。表2 9种有机氯农药回归方程

　　2.3.2 方法的最低检测限试验

　　配制质量浓度为0.1 μg/l的混合对照品溶液进样，以3倍的噪声作为方法的最低检出量，测得αbhc、βbhc、γbhc、δbhc、pp′dde、pp′ddd、op′ddt、pp′ddt和pcnb的最低检测浓度均为100 ng/l。

　　2.3.3 精密度试验 精密吸取质量浓度为10 μg/l的混合对照品溶液2 μl，重复进样6次，按“2.2”项下的色谱条件操作，以峰高 计算 ，结果αbhc、βbhc、γbhc、δbhc、pp′dde、pp′ddd、op′ddt、pp′ddt和pcnb的rsd值分别为1.01%、1.67%、2.02%、1.72%、1.21%、1.71%、1.23%、2.80%、1.62%，表明仪器精密度良好。

　　2.3.4 重复性试验 精密称定罗汉果样品(1号样)6份，按照2.1项下制备样品，依法测定，将各组分的峰高依次代入各自的回归方程计算，测得αbhc、βbhc、γbhc、δbhc、pp′dde、pp′ddd、op′ddt、pp′ddt和pcnb的平均质量分数(rsd值)分别为94.64 ng/g(3.04%)、97.02 ng/g(2.26%)、92.63 ng/g(2.87%)、102.30 ng/g(2.91%)、97.11 ng/g(2.61%)、103.54 ng/g(3.47%)、107.39 ng/g(2.91%)、98.18 ng/g(2.88%)、101.13 ng/g(2.71%)，表明方法的重复性良好。

　　2.3.5 稳定性试验 取同一份罗汉果样品(1号样)溶液2 μl，分别于0，2，4，6 h依法连续进样4次进行测定，以峰高计算αbhc、βbhc、γbhc、δbhc、 pp′dde、 pp′ddd、op′ddt、pp′ddt和pcnb的rsd分别为0.01%、0.01%、0.02%、0.02%、0.01%、0.01%、0.01%、0.01%、0.01%，表明样品溶液在6 h内测定稳定性良好。

　　2.3.6 加样回收率试验 取同一批罗汉果样品(1号样)6份，每份取1 g，精密称定。分别准确加入质量浓度为150 μg/l混合对照品溶液1.0 ml，混合后挥干溶剂。按“2.1”项方法制备回收率供试样品溶液，依法进行测定，计算回收率，结果见表3。

　　2.3.7 样品的含量测定 准确称取各批次罗汉果样品，按“2.1”项方法制备样品溶液，依法进行测定，按外标法以峰高计算含量，结果见表4，图1。表3 加样回收率试验　表4 罗汉果药材中有机氯测定结果

　 　3 讨论

　　3.1 由表4的数据可见，六六六残留总量(质量分数)为260～388 ng/g，ddt残留总量为250～445 ng/g，pcnb残留总量为65～101 ng/g。2010年版《 中国 药典》未对罗汉果[3]197的农药残留量进行限量， 参考 同版药典中黄芪[3]283和甘草[3]80农药残留量限度规定，本文所检测的罗汉果样品中总六六六和总ddt均超出该两种药材限量200 ng/g的规定，pcnb除1号样品超出规定外，其它均符合小于100 ng/g的要求。实验结果表明罗汉果在种植过程中可能受到土壤或其它因素的影响，使药材中有机氯的残留量超标，建议在标准中增加该药材农药残留量限度的检查项目。

　　3.2 现代 中药产业倡导“绿色中药”，有机氯类农药是一类广谱杀虫剂，因其不易被日光分解、耐热、耐酸、挥发性低、半衰期长等特点而在环境中广泛存在,虽其残留量低，但对人体的危害不容忽视[4]。本实验以水丙酮二氯甲烷的溶剂系统，采用超声波提取及浓h2so4净化等步骤，建立对罗汉果中有机氯农药残留量进行测定的毛细管柱气相色谱外标法,为罗汉果的安全使用提供 科学 的质量控制依据。

【参考 文献 】
　[1] 谢宗万，范崔生，朱兆仪.全国中草药汇编:下册[m].北京：人民卫生出版社，1996：375-376.

　　[2] 南京中医药大学.中药大辞典:上册[m].上海:上海科学技术出版社，1997：1356.

　　[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：2010年版一部[m].北京：