玉郎伞多糖抗抑郁作用研究

作者：梁霜，王乃平，黄仁彬，谭宏棣，付书婕

【摘要】 目的研究玉郎伞多糖（yulangsan polysaccharides, ylsps）的抗抑郁作用。方法采用悬尾实验（tst）和强迫游泳实验（fst）观察ylsps对小鼠不动时间的影响，用酶联免疫吸附法（elisa）测定小鼠脑中单胺类神经递质去甲肾上腺素（ne）、多巴胺（da）、五羟色胺（5-ht）的含量。结果600 mg/kg ylsps能明显缩短小鼠悬尾不动时间，300，600 mg/kg ylsps能明显缩短小鼠强迫游泳不动时间。与空白组相比，300，600 mg/kg ylsps显著提高了小鼠脑中ne、da和5-ht的浓度（p<0.05）。结论ylsps对“行为绝望”动物模型有明显的抗抑郁作用，其机制可能与其提高脑中单胺类神经递质水平有关。

【关键词】 玉郎伞多糖； 抗抑郁； 悬尾实验； 强迫游泳实验； 单胺类神经递质

玉郎伞是一种尚未开发的广西习用壮药,为蝶形花科植物疏叶崖豆millettia pulchra kurz (dunn) 的块根，具有舒筋活络、补虚润肺之功能，民间用于腰腿痛、风湿痛和慢性肝炎，也用于智力减退、消化不良、营养不良和病后虚弱等治疗。玉郎伞多糖（yulangsan polysaccharides,ylsps）是玉郎伞提取物中主要的有效成分,由葡萄糖和阿拉伯糖组成［1］。本课题组前期研究表明，ylsps具有护肝、抗自由基、抗痴呆等作用［2～4］。本文对ylsps的抗抑郁作用进行了初步研究。

　　1 材料与仪器

　　1. 1 动物昆明种小鼠，spf级，♂，体重18～22 g，由广西医科大学实验动物中心提供，许可证号：scxk（桂）2003-0003。动物分笼饲养，自由饮水和取食。

　　1. 2 实验药物ylsps由本室自行提取；盐酸氟西汀胶囊（fluoxetine，flu，批号：071201，上海中西制药有限公司）。实验前将各试药用蒸馏水配成所需浓度，4℃冷藏备用。

　　1. 3 仪器与试剂tgl-16g-a冷冻离心机（上海安亭科学仪器厂）；mk3酶标仪（thermo electron corporation）；fj-200高速均质分散机（上海标本模型厂）；hh-w21-cr600电热恒温水温箱（北京长安科学仪器厂）；开场实验箱（高50 cm，长80 cm，宽80 cm，底面平均划分为16格面积相等的格子）自制；悬尾实验观察箱（高35 cm，长25 cm，宽25 cm）自制；秒表；去甲肾上腺素试剂盒（美国adl公司，批号：rt110371）；多巴胺试剂盒（美国adl公司，批号：rt110371）；五羟色胺试剂盒（美国adl公司，批号：rt110371）。

　　2 方法

　　2.1 小鼠悬尾实验小鼠随机分成5组：空白组，flu （20 mg/kg） 组，ylsps低、中、高剂量（150，300，600 mg/kg）组。每日上午8时灌胃给药，1次/d，连续7 d。末次给药30 min后将小鼠尾末端2cm处固定倒悬于自制悬尾箱内，头部离箱底约5cm，观察6 min，记录后4 min内的累计不动时间。判定不动标准：小鼠在空中停止挣扎，身体呈垂直倒悬状，静止不动。

　　2.2 小鼠强迫游泳实验分组和给药同悬尾实验。末次给药30 min后将小鼠单独置于高20 cm，直径14 cm，水深10 cm，水温25℃的圆形玻璃缸内，玻璃缸之间放一个不透明隔板，以防小鼠彼此看到，观察6 min，记录后4 min内的累计不动时间。判定不动标准：小鼠在水中停止挣扎，或呈漂浮状态，仅有细小的肢体运动以保持头部浮在水面。

　　2.3 开场实验分组和给药同悬尾实验。末次给药30 min后将小鼠放入自制开场实验箱中，适应1 min后，记录动物5 min内由底面中心开始走动的穿越格数。

　　2.4 酶联免疫吸附实验检测脑中单胺类神经递质水平　“小鼠强迫游泳实验”测试结束后立即将小鼠断头，在冰台上迅速取全脑，称重，脑组织加入5倍量（重量/体积）预冷生理盐水，低温均浆，14 000 r/min冷冻高速离心15 min，取上清，置-86℃冰箱保存，以供单胺类神经递质含量测定。50μl上清液和10 μl生物素标记液加入预先包被一抗的96孔酶标板，加入100 μl 酶标记液，（36±2）℃孵育反应60 min，甩尽反应液，洗板6次，每孔加入底物a、b液各50 μl，37℃避光孵育反应15 min，加入50 μl终止液，终止反应。用酶标仪测定450 nm处各孔的od值。同时测定标准品od值，以od值为纵坐标,浓度为横坐标绘制标准曲线。从坐标曲线查得各样本浓度。

　　2.5 数据统计处理　数据用以±s的形式表示，采用spss13.0统计软件,选用单因素方差分析（anova）来检验各组数据之间的差异性。

　　3 结果

　　3.1 ylsps对小鼠悬尾实验、强迫游泳实验中不动时间的影响与空白组相比， 600 mg/kg ylsps能明显缩短小鼠tst、fst的不动时间（p<0.01）。 300mg/kgylsps能明显缩短小鼠fst的不动时间（p<0.05），提示ylsps具有一定的抗抑郁作用。结果见表1。表1 ylsps对小鼠悬尾和强迫游泳不动时间的影响（略）

　　3.2 ylsps对小鼠自主活动的影响ylsps各剂量组小鼠的自主活动与空白组比较无明显差异，表明该药对小鼠自主活动无显著影响。结果见表2。表2 ylsps对小鼠自主活动的影响（略）

　　3.3 ylsps对小鼠脑组织单胺类神经递质水平的影响

　　flu可以显著增加脑中5-ht的含量，而对ne和da没有显著影响。300，600 mg/kg ylsps可以显著提高脑中ne、da和5-ht的水平。结果见表3。表3 ylsps对小鼠脑组织单胺类神经递质水平的影响（略）

　　4 讨论

抑郁症是一种由各种原因引起的以抑郁为主要症状的一组心境障碍或情感性障碍，其主要临床表现为情绪低落，消极待物，无助感，精力及注意力下降等。抑郁症发病机制甚为复杂，诱发原因较多。目前多数人认可去甲肾上腺素( ne )、5-羟色胺( 5-ht )、多巴胺( da )等神经递质可能参与抑郁症的神经生化机制。研究发现，5-th功能降低会导致人们心境抑郁、食欲减退、失眠、焦虑不安、性功能障碍、不能应付应激、活动减少等症状［5］。ne不足导致注意力难以集中，情感抑郁，工作记忆障碍等精神症状。临床上对抑郁症的治疗主要是直接或间接增加突触间隙中ne和5-ht。

　　小鼠强迫游泳实验（fst）是由porsolt于1977年首先提出，小鼠悬尾实验（tst）是受fst的启发而创建的。fst和tst是两个经典的抗抑郁剂评价模型，各提供了一个无可回避的压迫环境。实验中小鼠最初表现为挣扎、试图逃脱，一段时间后呈不动状态，反映了一种被称之为“行为绝望和扭曲( behavioral despair and variant )”或“对强压环境适应的失败( failure to adapt to stress )”状态。fst 和tst两种行为绝望模型对绝大多数抗抑郁药敏感，操作简单、快捷，被广泛用于该类药物的初筛。

　　本文以这两个模型为基础，对ylsps的抗抑郁作用进行初步研究。实验结果表明，ylsps能显著缩短小鼠悬尾实验和强迫游泳实验的累计不动时间，显示了一定的抗抑郁作用。开野实验中各剂量ylsps对小鼠自主活动均无显著影响，提示其抗抑郁作用与中枢兴奋性作用无关，故可排除其假阳性结果的可能性。与空白组相比，连续给药7d后，300、600 mg/kg ylsps能显著提高脑中ne、da、5-ht的水平，与本课题组前期研究发现一致［6］。鉴于此，我们推测ylsps可能是通过直接或间接升高脑内突触间隙中ne、da、5-ht水平而发挥抗抑郁作用的，其确切神经生物学机制有待于进一步研究。

【参考文献】
1］段小群,焦 杨,张士军,等．玉郎伞多糖对肝星状细胞增殖和i型胶原合成的影响［j］．中国现代医学杂志，2008,18(4):423.

　　［2］黄仁彬，段小群，焦 杨，等．玉郎伞提取物对小鼠急性化学性肝损伤的保护作用及其机制的研究［j］．广西医科大学学报，2003,20(6):874.

　　［3］陈 健，黄媛恒，王乃平，等．玉郎伞多糖和皂苷对氧自由基清除作用研究［j］．中药药理与临床，2007,23(5):100.

　　［4］黄忠仕，黄仁彬，李江，等．龙眼参多糖对不同模型拟痴呆小鼠的益智作用［j］．右江民族医学院学报，2004,26(4):463.

　　［5］whale r，clifford e m，bhagwagar z，et al．decreased sensitivity of 5-ht receptors in melancholic depression［j］．brainjour-nalpsychiatry，2001,178:454.

　　［6］黄忠仕，林 兴，张士军，等．龙眼参多糖对samp8学习记忆及脑组织单胺类神经递质含量影响的研究［j］．中国药房，2008,19(9):647.