针刺对腹部术后大鼠胃肠动力及炎症反应的影响

【摘要】 【目的】观察针刺对腹部术后大鼠胃肠动力及炎症反应的影响。【方法】选用sd大鼠，随机分为空白组、假手术组(行开腹关腹操作)、模型组(行结肠吻合术)、针刺组，针刺组及假手术组术后均针刺双侧足三针(足三里、三阴交、太冲)，连续3 d。检测各组大鼠排便情况、核扫描胃液相排空实验及结肠组织病理变化。【结果】针刺组与假手术组均能显著缩短腹部术后首次排便时间，增加排便粒数和质量，降低60 min胃残留率(均p<005或p<001);针刺能促进结肠吻合术后结肠组织的溃疡愈合，减轻炎症水肿。【结论】针刺足三针对腹部术后胃肠运动功能的调整作用与其能促进胃排空及减轻结肠组织病理损害有关。

【关键词】 胃肠活动/针灸疗法;结肠/病理学;手术后期间;疾病模型，动物;大鼠;穴，足三里;　穴，三阴交;穴，太冲

　腹部术后胃肠运动功能的恢复,是平稳度过围手术期的关键环节,对术后全面康复具有重要意义。将针刺运用于腹部术后胃肠运动功能的调整,目前已取得一定成效[1-3]。本研究在此基础上对针灸疗法调节术后胃肠运动功能的机制进行探讨,旨在为其临床应用提供实验依据。现报道如下。

　　1材料与方法

　　11主要试剂与仪器体积分数为10%福尔马林(广州市秀威贸易有限公司),酒精(南宁腾健医用消毒制品有限公司),苏木素(南京生兴生物技术有限公司),伊红(北京博奥森生物技术有限公司),二甲苯(北京金辉化工试剂有限公司),中性树脂(广州鑫日化工科技有限公司)。锝99m喷替酸盐注射液(99mtcdtpa)由北京原子高科公司提供,放化纯度>95%。2135型病理切片机由德国leika公司生产，ys2h型光学显微镜由日本olympus公司生产。vertex v60型双探头可变角度单光子发射型计算机断层显像仪(spect),配平行孔低能高分辨型准直器，由以色列varicam公司生产。

　　12动物及分组spf级健康sd大鼠40只,雌雄各半,体质量250～300 g,由广州中医药大学实验动物中心提供,合格证号：0055935。按完全随机法分为4组,针刺组、模型组、假手术组、空白组。

　　13结肠吻合模型的复制[4-7]术前禁食禁水12 h,体积分数10%水合氯醛用过滤器过滤后再按3 mg/kg行腹腔注射麻醉。仰卧位固定,常规备皮、消毒、铺无菌巾,于下腹部正中逐层入腹,切口长约2 cm,寻找到大鼠盲肠下2 cm处结肠,切断后行原位缝合(一层缝合法),用连续缝合法缝合腹膜及肌层,再用间断缝合法缝合大鼠皮肤。手术当天禁食禁水,术后第1、2天流质饮食,第2天晚上起禁食,为指标检测做胃肠准备,术后第4天处死大鼠检测各项指标。假手术组将禁食48 h的sd大鼠开腹后,将胃、小肠和部分结肠移出腹腔外并用温生理盐水纱布覆盖。30 min后将移出腹外的脏器回纳腹腔,缝合腹部切口。术后当天恢复正常饮食,不控制食量;术后第2天晚上起禁食,为指标检测做胃肠准备;术后第4天处死检测各项指标。

　　14穴位定位与针刺方法取足三针(双侧后三里,相当“足三里”、双侧三阴交、双侧太冲)，定位参考《实验针灸学》[8]。针刺组、假手术组大鼠术后清醒即予针刺,用直径018 mm、长10 mm的美容针直刺入穴位,每5 min缓慢提插捻转2～3次,每天针刺1次,每次15 min。模型组、空白组每天同一时间放于固定器中15 min，疗程3 d。

　　15排便观察观察并记录大鼠术后首次排便时间。术后1～3 d每天收集大鼠的粪粒,烘干后用电子天平称质量,记录每天排便粒数、排便质量。

　　16核素扫描胃液相排空试验术后第3天检查前将所有大鼠禁食12 h,用安定4 mg/kg对大鼠行腹腔注射。将大鼠置入圆筒固定器,头露于外,予液体试验餐灌胃(液体试验餐由99mtcdtpa 和9 g/l生理盐水混合配制,灌胃剂量为15 ml/只，试验餐内含01～02 mci 99mtcdtpa)。采用大鼠立位圆筒固定器，将大鼠放置于检测床上,调整低能通用型准直器的探头视野中心于大鼠腹部,动态连续采集,能峰160 kev,窗宽20,矩阵256×256,zoom(放大倍数)10,采集时间20 s/帧,术前30 min/次,术后50 min/次。采用计算机软件(gastricemptying)处理后获得胃排空—时间曲线。通过曲线找出相对应的胃半排时间(get1/2)及60 min胃残留率。

　　p胃残留(%)=60 min胃内放射性k)/总放射性×100%(k为从0时至60 min的放射性衰变校正系数)。

　　17病理切片的制作动物处死后,取盲肠下2 cm处结肠(相当吻合口处),长度为2 cm。将组织剖开去除内容物,用磷酸盐缓冲液(pbs)漂洗,于体积分数10%的福尔马林中固定，修块,梯度酒精脱水，包埋,修理蜡块,切片,烤片。用二甲苯和下行梯度酒精脱蜡,水洗;用苏木素复染5～10 min,水洗;接着用体积分数1%盐酸酒精分化,温水洗10 min，再用伊红1 min，最后用上行梯度酒精脱水,二甲苯透明。封片(中性树胶),阅片,照相。

　　18统计学方法采用spss 160软件进行数据的统计分析。

　　2结果

　　21排便观察

　　211各组术后首次排便时间比较

　　由表1可知,针刺组术后首次排便时间与模型组比较差异有显著性意义(p<005),说明针刺能缩短结肠吻合术后首次排便时间。针刺组与假手术组比较，差异无显著性意义(p>005),说明针刺对不同腹腔手术均有作用。

　　212各组术后大鼠排便粒数与质量变化比较

　　由表2、表3可知,术后第1~3天排便粒数和质量模型组、针刺组、假手术组与空白组比较差异均有显著性意义(p<001),说明手术造模成功。针刺组与模型组比较,术后第1天无明显差异,术后第2、3天均显著增加(p<005),说明针刺对结肠吻合术后胃肠运动功能有良性调整作用,而术后动物清醒即给予针刺并不能促进提早排便,这可能与介入时间过早有关。针刺组与假手术组术后1~3 d排便粒数和质量比较差异均无显著性意义(p>005),说明针刺对不同术式的胃肠运动功能均有调整作用,针刺普遍适用于腹部术后胃肠运动功能紊乱的调整。表1各组术后首次排便时间比较

　　组别nt首次排便/d针刺组10 200±047②模型组10 250±053①假手术组10160±052统计方法：假手术组与模型组及针刺组比较采用t检验，针刺组与模型组比较采用独立样本t检验;①p<005,与假手术组比较;②p<005,与模型组比较表2各组术后排便粒数比较(±s)

　　组别n术后第1天术后第2天术后第3天针刺组10070±221① 610±534①③ 1130±804①③模型组10010±032① 210±008①② 500±474①②假手术组10180±249①600±025① 1110±781①空白组103600±12893310±7553200±1395统计方法：符合方差齐性和正态分布的资料用t检验,否则用秩和检验;①p<001,与空白组比较;②p<005,与假手术组比较;③p<005,与模型组比较表3各组术后排便质量比较(±s)

　　组别n术后第1天术后第2天术后第3天针刺组10005±017① 021±017①② 060±035①②模型组10001±003① 007±012①④ 029±029①③假手术组10008±009①025±012①062±038①空白组10471±224755±331680±249统计方法：符合方差齐性和正态分布的资料用t检验,否则用秩和检验;①p<001,与空白组比较;②p<005,与模型组比较;③p<005,④p<001,与假手术组比较

　　22各组核素扫描胃液相排空试验结果由表4可知,模型组与空白组的60 min胃残留率比较差异有显著性意义(p<005),说明造模成功。针刺组与模型组比较差异有显著性意义(p<001),说明针刺能促进胃排空速度。针刺组与空白组比较差异无显著性意义,说明术后3 d在针刺作用下胃排空功能基本恢复正常。针刺组与假手术组比较胃排空无显著性差异,可能存在2种情况：①假手术对术后胃排空影响不大,其胃排空与空白组相仿,针灸治疗对胃排空正常者无促进作用;②假手术对术后胃排空有一定影响,但针刺治疗促使其胃排空功能得到恢复,故其与针刺组无明显差异。结合对症状的观察,假手术组大鼠出现术后食欲下降,排便减少等症状,提示针刺对不同术式造成的胃肠运动功能紊乱均有治疗作用,且治疗作用相仿,均能使之恢复正常。假手术组与空白组比较,胃排空率差异无显著性意义,也说明了针刺治疗的作用。表4各组60 min胃残留率比较(±s)

　　组别np胃排空/%针刺组105190±1533②模型组107630±973①③假手术组106043±2048空白组106221±1817统计方法：t检验;①p<005,与空白组比较;②p<001,与模型组比较;③p<005,与假手术组比较

　　23各组结肠组织病理检查结果图1(彩图见第555页)结果显示：空白组和假手术组结肠组织正常,结构清晰,未见溃疡和炎症水肿。模型组和针刺组均可见手术线头和异物反应,存在黏膜溃疡和肌层、黏膜下层及浆膜层炎症水肿。模型组结肠溃疡和炎症水肿最重,可见大量急慢性炎症细胞(中性粒细胞、淋巴细胞)浸润,细胞密集,肠黏膜可见多处溃疡口,肠浆膜脂肪空泡化,部分组织出血坏死;可见炎性肉芽组织,内含杂乱的表现不一的小血管。针刺组溃疡和炎症水肿程度较模型组轻,炎症细胞和溃疡较模型组少,未见出血坏死。说明针刺能促进溃疡的愈合,减轻炎症水肿。

　　3讨论

　　中医认为,胃肠运动功能与脾胃气机的升降转输密切相关。腹部手术扰乱了体内正常的气机运行,且损耗胃肠气血,故形成肝气失于疏泄,脾胃失于运化的局面。脏气疏泄运化失司,腑气壅塞不畅而发病。

　　靳三针疗法是靳瑞教授根据多年临床经验及教学实验研究创立的一个学术体系。其中的“足三针”组穴是靳三针里使用频率最高的组穴之一,由足三里、三阴交、太冲组成。足三里为足阳明胃经之合穴,三阴交为足太阴脾经腧穴,两穴合用,脾胃表里相应,脏腑经气阴升阳降,主调后天之本,一身气机升降的枢纽。太冲是肝经原穴,肝胆表里相通,为少阳枢机,主疏泄肝经郁滞之气以调畅气机。三阴交又为足太阴、足少阴、足厥阴三经的交会穴,与太冲合用,借肝气之升发以助脾土升清,使土得木而达。三穴合用,共有抑木扶土之意,共奏疏肝健脾之功。

　　胃肠动力研究中最早使用的直接指标是胃肠推进率，采用体外放射性同位素示踪使活体定量测量胃肠排空成为可能，而且没有刺激性和创伤,故使用核扫描胃肠排空实验检测胃肠动力研究所得的结果被认为是评价消化道传输的“金标准”[9]。本研究对术后第3天的大鼠进行了核素扫描胃排空实验，结果表明,针刺具有促进腹部术后胃排空功能恢复的作用,模型组大鼠的60 min胃残留率与正常大鼠比较差异有显著性意义，而针刺组大鼠的胃排空已恢复至正常大鼠水平，表明针刺能促进术后胃肠动力的恢复。

　　术后胃肠动力的恢复快慢往往与手术创伤程度密切相关。手术对胃肠组织创伤大,溃疡炎症程度重,恢复往往较慢。本实验结肠组织病理切片结果显示,假手术组结肠组织基本没有溃疡和炎症水肿,模型组存在较重的溃疡和炎症水肿,针刺组溃疡和炎症水肿较轻,说明不同术式对结肠组织创伤程度不同,而针刺能促进溃疡的愈合,减轻炎症水肿以修复创伤。结合排便观察,我们可以看到,溃疡炎症较轻的假手术组和针刺组排便恢复较快,而溃疡炎症较重的模型组排便恢复较慢。故由此推断,针刺促进溃疡愈合,减轻炎症水肿的作用可能是其调整腹部术后胃肠运动功能的机制之一。

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