RP-HPLC法测定西洛他唑中的有关物质

摘　要：目的 用反相高效液相色谱法（RP-HPLC）检测西洛他唑原料中有关物质。方法 采用十八烷基硅烷键合硅胶柱（250mm×4.6?m)kromasil，梯度洗脱，DAD-UV检测器。结果 西洛他唑主峰与各杂质峰分离度好。结论 本方法简单、快速、专属性好、灵敏度高。

关键词：西洛他唑；反相高效液相色谱法；有关物质；峰纯度

西洛他唑是第一个批准用于间歇性跛行的药物，于1998年在日本上市，1999年5月获美国FDA批准上市。西洛他唑是喹啉类衍生物，通过抑制细胞的磷酸二酯酶(特别是对PDEⅢ的抑制)来治疗稳定性间歇性跛行。西洛他唑和它的代谢产物是cAMP-PDEⅢ抑制剂。抑制磷酸二酯酶活性和阻碍cAMP降解(和转化)导致cAMP在血小板和血管内上升，抑制了血小板聚集和使血管扩张，防止血栓形成和血管阻塞，从而有效的达到治疗目的。
1 仪器与试药：
1.1 仪器  日本岛津LC－2010高效液相色谱系统； SPD-M20A光电二级管阵列检测器；LC-solution工作站；XS105S型电子天平(瑞士梅特勒-托利多公司)。
1.2  试药  西洛他唑（重庆康乐制药厂，含量99.54%，批号1101001）；西洛他唑对照品（中国药品生物制品检定所，批号：10063-200301）。乙腈为色谱纯（TEDIA公司）； 水为自制蒸馏水；盐酸，氢氧化钠 ，双氧水， 分析纯（汕头市西陇化工厂）；
2  方法与结果
2.1 色谱条件  色谱柱：kromasil C18（4.6mm×250mm）；流动相A为乙腈；流动相B为水，流速1.0ml/min；DAD-UV检测器；进样量20?l，柱温25℃，线性梯度洗脱程序见下表

2.2 专属性研究
　　取本品约100mg，置100ml量瓶中，加1mol˙L盐酸溶液10ml，室温条件下放置2小时，用相应碱中和，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过作为强酸破坏样品；取本品约100mg，置100ml量瓶中，加1mol˙L氢氧化钠溶液5ml，室温条件下放置2小时，用相应酸中和，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过作为强碱破坏样品；取本品约1g，置于蒸发皿中，放入170℃烘箱中，放置15分钟，取适量加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过作为高温破坏样品；取本品约100mg，在4500±500Lx强光照射2h，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过作为强光破坏样品；取本品约100mg，置100ml量瓶，加10ml 30%的过氧化氢溶液，室温条件下放置2小时；加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过作为氧化破坏样品，取各条件下破坏样品, 高效液相色谱-二极管阵列检测器进样测定，进样量为20μl，记录色谱图，结果见图1，结果表明上述色谱系统与测定方法能使西洛他唑的热、酸、碱、氧化和光破坏试验降解产物色谱峰与主峰获得良好的基线分离，二极管阵列检测器进行峰纯度测定，阈值为0.9999，可认为色谱峰为单一成分。取溶剂直接进样，结果未见出峰, 说明溶剂对检测无干扰。

2.3  不同方法专属性比较
　　为方便比较，按照USP31西洛他唑原料有关物质色谱条件，采用Inertsil ODS-3柱（100 mm×4.0 mm，5 μm），对高温破坏样品进样分析，结果见图2

 
　　结果表明，按照USP31中有关物质检测条件，虽可检测出相关杂质，但药物与破坏后产生的杂质保留时间较短，相互干扰，不能有效分离及定量，峰纯度显示色谱峰含有不纯物。
3 讨论
　　使用二极管阵列检测器，可以对色谱峰进行光谱扫描，峰纯度鉴定等定性分析，已广泛用于HPLC检测波长的选择和主成分色谱峰纯度的分析。
　　《中国药典》2000年版（2002年增补版）西洛他唑片质量标准中未规定有关物质检查，国家食品药品监督管理局试行标准YBH05382004中对有关物质检查采用等度洗脱，文献报道也大多采用等度洗脱，USP中对西洛他唑有关物质检查采用梯度洗脱。实验过程中，笔者对USP标准所采用方法进行重现，随可检测出较多杂质，但分离度不理想，原因可能是USP标准中采用4.6mm×10cm短柱，虽能减少分析时间，但因主成分及杂质峰保留时间较短，难以做到对各破坏后产生的杂质的有效分离，笔者对此方法进行了改进，选用4.6mm×25cm Kromasil 色谱柱，调整梯度洗脱程序，可以有效分离各杂质和主成分。对西洛他唑有关物质检测方法的改进将有利于进一步控制西洛他唑质量，保证药品使用的安全性和可靠性，并建议对西洛他唑片质量标准增订有关物质检查。
　　
　　
　　   
　　
　　

参考文献
[1] 《中国药典》2000年版（2002年增补版）西洛他唑片质量标准
[2] 西洛他唑原料质量标准（国家食品药品监督管理局试行标准YBH05382004）.
[3]  USP31-NF26,Monographs：Cilostazol
[4] 李晓红. HPLC 法测定西洛他唑片的有关物质. 中国药事，2010：24（12）：1219-1220.
[5] 郑一美反相高效液相色谱法检测西洛他唑中有关物质药物鉴定20061514 20-21