蒲薏颗粒药效学实验研究

作者：迟明艳 黄勇 王爱民 兰燕宇 王永林

【摘要】 目的对蒲薏颗粒进行药效学研究。方法观察蒲薏颗粒对荷瘤(h22)小鼠增效减毒作用，对艾氏腹水癌(eac)小鼠生命延长率的影响，对体外培养人食管癌(eca-109)细胞的影响，对荷瘤小鼠免疫功能的影响。结果蒲薏颗粒能增强化疗药物抑瘤作用、拮抗化疗药物对wbc及骨髓有核细胞的抑制;对艾氏腹水癌小鼠生存时间有明显的延长作用;并显著抑制eca-109细胞增殖的细胞毒作用;同时该药具有提高小鼠细胞免疫功能的作用。结论蒲薏颗粒具有抗癌和增强免疫作用。

【关键词】 蒲薏颗粒; 抗肿瘤; 免疫增强

蒲薏颗粒由蒲公英、生薏苡仁等5味中药组成，具有清热解毒、活血化瘀、补益气血的功效，临床用于肿瘤放、化疗所致的气血两虚有很好的疗效，我们根据其功能主治进行了有关的主要药效学实验。

　　1 材料

　　1.1 动物 km小鼠，雄性，体重18～22 g;sd大鼠，雄性，体重180～210 g，均由贵阳医学院实验动物中心提供，动物合格证号：scxk(黔)2002-0001。balb/c小鼠(spf级)，雄性，体重16～20 g，简阳市简城比尔动物养殖场提供，动物合格证号：0011159。

　　1.2 瘤株 小鼠肝癌h22：由华西医科大学肿瘤研究所提供;艾氏腹水癌(eac)细胞，由重庆医科大学生物工程系超声研究所提供。人食管癌细胞(eca-109)：由中科院生命科学研究所提供。

　　1.3 药物 蒲薏颗粒(py)由贵州渝生制药有限公司提供，每克颗粒含4g生药，批号：20030306;环磷酰胺(ctx)，上海华联制药有限公司生产，批号：031001;5-氟尿嘧啶(5-fu)，上海旭东海普药业有限公司生产，批号：030405;噻唑蓝(mtt)：sigma公司出品，批号：206-069-5。

2 方法与结果

　　2.1 蒲薏颗粒对小鼠肝癌h22化疗的增效减毒作用[1～3]在无菌条件下于小鼠右腋皮下接种2×107/ml的h22细胞悬液，0.2 ml/只，24 h后按体重随机分为模型对照组，5-fu组，py高、低剂量组，5-fu加py高剂量组，5-fu加py低剂量组。各组小鼠按表1的剂量灌胃(ig)给药，1次/d，连续10 d，模型对照组给予等量生理盐水(ns)。停药次日称重后，摘眼球取血作外周血象检查，脱颈椎处死动物，剖取并称重瘤块，计算抑瘤率。剥离小鼠右股骨，用1640培养液通过针头反复冲洗骨髓并测定洗液中骨髓有核细胞数。见表1。

　　肿瘤抑制率(%)=(1-实验组平均瘤重对照组平均瘤重)×100%

　　由表1结果可见，蒲薏颗粒与5-fu合用，可使5-fu的肿瘤抑制率明显提高;白细胞、骨髓有核细胞计数也有显著性差异(p<0.05或p<0.01);提示蒲薏颗粒具有增效减毒的作用。表1 对小鼠肝癌h22化疗的增效减毒作用与模型对照组比较，*p<0.05，**p<0.01;与5-fu组比较，#p<0.05，##p<0.01;n=10

　　2.2 蒲薏颗粒对艾氏腹水癌(eac)小鼠生命延长率的影响 [4～5]于无菌条件下小鼠腹腔常规接种艾氏腹水癌小鼠(1×108/ml)的细胞悬液，瘤液0.2 ml/只，接种后24 h，按体重随机分为5组：模型对照组，ctx组(20 mg/kg)，py高、中、低剂量组，各组小鼠按表2的剂量ig给药，1次/d，连续10 d，模型对照组给予等量ns。记录存活天数，计算生命延长率，比较各组间差异。结果见表2。

　　生命延长率(%)=给药组平均生存时间-对照组平均生存时间对照组平均生存时间×100%表2 蒲薏颗粒对艾氏腹水癌(eac)小鼠生命延长率的影响由表2结果可见，蒲薏颗粒高、中、低剂量组eac荷瘤小鼠生存时间与模型对照组比较均有显著差异,生命延长率最高达50%以上,表明该药对艾氏腹水癌小鼠生存时间有明显的延长作用。

　　2.3 对体外培养人食管癌(eca-109)细胞的影响[1]取大鼠30只，随机分为对照组(ns 10 ml/kg)、环磷酰胺组 (20 mg/kg)、蒲薏颗粒组(12 g/kg)。各组动物分别ig给药，1次/d，连续7 d。末次ig后2 h乙醚麻醉，无菌条件下股动脉取血，4℃ 2 500 r/min离心25 min，吸取血清，同组血清混匀，以0.22 μm微孔滤膜正压过滤除菌，各组保留部分全血清，其余血清用1 640分别配成含鼠血清60%，30%，15%的培养基，-40℃保存备用。

　　取在对数生长期的人食管癌细胞标准株(eca-109)，用胰酶消化后，稀释成 1×105个/ml，台盼蓝染色，检测活细胞达95%以上。分别将肿瘤细胞接种于96孔板，每孔100 μl，培养24 h后，观察细胞贴壁后，分别换成含不同浓度大鼠血清培养基，每组10个平行孔。培养24 h，每孔内加入5 mg/ml mtt10 μl，继续培养4 h，弃去培养孔内培养基，每孔加入二甲基亚砜100 μl，待蓝色结晶完全溶解后，用酶标仪(波长490 nm)测定各孔吸光度(a)。见表3。

　　细胞毒活性(%)=(1-实验组od值对照组od值)×100%　表3 含药血清对eca-109细胞的细胞毒活性与相应浓度对照组鼠血清比较,*p<0.05，**p<0.01;n=10

　　与相应血清浓度的对照组比较，蒲薏颗粒各剂量组的od值明显减小，差异显著(p﹤0.05，p﹤0.01)，高剂量组细胞毒活性大于20%。显示蒲薏颗粒有显著的抑制eca-109细胞增殖的细胞毒作用。

　　2.4 对荷瘤(s180)小鼠细胞免疫功能的影响balb/c小鼠，在无菌条件下，接种s180细胞悬液，0.2 ml/只，接种后24 h，分组，给药方法见表4。分别于给药的第3天和第6天动物皮下注7%的2.4-二硝基氯苯丙酮液0.02 ml/只致敏。于第1次致敏的第10天，动物一侧耳用1%的2.4-二硝基氯苯甘油溶液0.02 ml进行涂布攻击，另侧耳作对照，24 h后处死动物，剪下两耳，打孔器取耳片，称重，以左右两耳片的重量差作为肿胀度，比较各组间差异。同时取胸腺、脾脏称重，计算胸腺指数和脾脏指数。见表4。

　　由表4结果可见，蒲薏颗粒可使荷瘤小鼠降低的迟发型超敏反应水平、胸腺指数和脾脏指数明显改善，具有提高荷瘤小鼠的细胞免疫水平作用。表4 对荷瘤(s180)小鼠细胞免疫功能的影响与模型对照组比较，*p<0.05，**p<0.01

　　3 讨论

　　“蒲薏颗粒”处方为贵州省民间中医祖传经验方，临床应用五十余年，由蒲公英、薏苡仁等5味药组成。方中蒲公英清热解毒、消肿散结，利尿通淋。现代药理学研究其主要成分蒲公英多糖是一种免疫促进剂，其抗癌活性与免疫激活效果有关[6];薏苡仁清热排脓、健脾渗湿，伸筋除痹痛，其中的薏苡仁内酯能抑制艾氏腹水癌，而且能参与机体免疫功能，提高机体的免疫监视[7]。方中其他3味药：何首乌、灵芝、三棱则扶正以助君臣药的祛邪之功。

　　本实验结果也表明，蒲薏颗粒确有抗癌和免疫增强作用，从而在实验研究上为蒲薏颗粒治疗恶性肿瘤提供了理论依据,同时印证了蒲薏颗粒的临床疗效。

【参考文献】
　　[1] 王北婴,李仪奎.中药新药研制开发技术与方法[m].上海：上海科学技术出版社，2001：735.

　　[2] 刘明霞，李贵海.癌敌胶囊对环磷酰胺的增效减毒作用[j].时珍国医国药，2000, 17(3)：202.

　　[3] 朱建伟, 孔 捷, 侯文静，等.参虫颗粒体内抗肿瘤实验研究[j].时珍国医国药，2007, 18(5)：1124,1125.

　　[4] 胡 蓉，代国友，王 瑜.扶正抗癌胶囊的抗癌作用及其毒性[j].华西药学杂志，2002,17(4)：258.

　　[5] 张民庆，陈华圣，许爱华，等.涤痰祛瘀汤对小鼠肿瘤的抑制作用及其机制探讨[j].南京中医药大学学报(自然科学版),2001,17(4)：221.

　　[6] 凌 云，蔡 申，张永林，等.蒲公英水煎剂免疫活性的实验研究[j].海军总医院学报，1999，12(1)：9.

　　[7] 陆 蕴，张仲苗，章荣华.薏苡仁油抗肿瘤作用研究[j].中药药理与临床，1999，15(6):21.