槲寄生抗肿瘤作用研究

摘要槲寄生提取物作为天然的抗癌药物在欧洲被应用已有几十年，近几年来人们发现其抗肿瘤活性成分主要是槲寄生凝集素、毒肽、生物碱，本文就其抗肿瘤作用做一综述。
论文关键词：槲寄生,凝集素,毒肽,生物碱,抗肿瘤作用

　　槲寄生（Viscum coloratum(Kom.)Nakai）为桑寄生科槲寄生属植物，是一种半寄生植物，常寄生于榆树、槲树等树上，其茎、叶入药。槲寄生化学成份主要包括三萜类、黄酮类、多糖、植物凝集素、槲寄生毒素、生物碱等。传统医学认为槲寄生有祛风湿，补肝肾，强筋骨，养血、安胎等功效，中医用来治疗风湿痹痛，腰膝酸软，胎动不安等症状[1,2]。近年来，有关槲寄生抗肿瘤作用的报道增多，其抗肿瘤活性成分主要为植物凝集素、槲寄生毒肽、生物碱。本文就植物凝集素、槲寄生毒肽、生物碱抗肿瘤作用的研究进行综述。

　　1凝集素的抗肿瘤作用

　　槲寄生凝集素（mistletoe lectin,ML）是一种糖蛋白，能够识别细胞膜表面糖蛋白的糖链，由A链和B链两个亚基组成。它的B链与细胞表面受体末端的半乳糖结合，然后经细胞的二硫键裂解系统,将A 链释放,经胞饮作用使A 链进入细胞内,A 链与60S 核糖体亚基中的28SRNA 结合,并断裂糖苷键,使60S 核糖体不能与延伸因子EF-2反应,致使蛋白质合成停止,细胞死亡[3]。

　　1.1凝集素种类及特性

　　目前从欧洲槲寄生中分离得到三种植物凝集素(ML)，ML-Ⅰ，ML-Ⅱ，ML-Ⅲ。三类ML具有同源的氨基酸序列。Blonski等[4]发现ML与恶性肿瘤细胞表面的糖配体结合率高达92.5%，因而其亦可作为其他抗肿瘤药物的靶向性运载工具。

　　1.2凝集素抗肿瘤机制

　　1.2.1抑制肿瘤细胞增殖 Kovacs 等[5]发现ML可以抑制骨髓瘤细胞RPMI-8226增殖，其有效剂量范围为5-20ng/106/ml。傅炜昕等[6]研究ML对肿瘤细胞的细胞毒性作用，结果显示ML注射液影响细胞周期的作用环节是阻滞细胞周期中S期的细胞进入G2+M期,导致G1期细胞百分比下降,从而抑制肿瘤细胞增殖。

　　1.2.2诱导肿瘤细胞凋亡 ML可诱导多种肿瘤细胞凋亡，Kim等[7]研究了ML对肝癌Hep3B细胞凋亡的作用，发现其是通过诱导产生活性氧（ROS）和下调线粒体膜电位使Hep3B细胞凋亡的。其中，SEK1/JNK1信号途径起了关键作用。ML-1（VAA-1）可通过Caspases途径诱导PLB-985和X-CGD细胞凋亡，细胞学检测出现明显DNA“梯状带”，并发现细胞骨架蛋白降解，核纤层蛋白B1是其作用的靶点[8]。

　　1.2.3免役调节作用 Enesel等[9]给消化道肿瘤患者进行术前和术后ML治疗，与对照相比，发现ML能显著减弱手术引起的免役抑制作用，并能增加NK细胞、T细胞、B细胞的数量及补体、IgG、IgA、IgM的含量。Huber等[10]通过外周血单核细胞(PBMC)研究了ML对人体免役力的影响。结果发现PBMC和1类细胞因子如IFN-γ、TNF-γ，2类细胞因子IL-5、IL-3，单核巨噬细胞因子IL-1、TNF-α明显增多。

　　1.2.4影响肿瘤血管生成 Elluru等[11]报道ML抗肿瘤的机制涉及肿瘤血管的生成。上皮细胞对肿瘤血管的形成具有重要的作用。Yan Huyen等[12]研究了ML对人静脉内皮细胞和永生性人静脉内皮细胞的作用，发现ML能诱导这两种细胞凋亡。ML还能显著降低小鼠非何杰金淋巴瘤内毛细血管的数量，从而影响肿瘤生长[13]。

　　1.2.5抑制肿瘤复发 ML用于表浅膀胱癌切除术后膀胱内灌注治疗，可降低膀胱癌的复发，且无明显的局部或全身性反应[14]。

　　1.2.6增强化疗药物的作用 Bantel等[15]研究发现ML作为辅助治疗药物可以增强拓扑异构酶抑制剂依托扑沙的抗癌作用。

　　1.2.7抑制端粒酶活性 ML能抑制人A253细胞端粒酶的活性，这也是其抗肿瘤机制之一[16]。Lyu等[17]检测了肝癌SK-hep-1和Hep3B细胞在ML作用后端粒酶的活性，结果显示ML以不依赖p53的方式抑制端粒酶的活性并呈时间相关性。

　　2槲寄生毒肽的抗肿瘤作用

　　槲寄生毒肽（viscotoxins，VT）是槲寄生中另一个重要的抗肿瘤活性成份，它们是一类相对分子量在5KDa左右的碱性多肽，含有46个氨基酸残基，富含半胱氨酸[18]。这类多肽对多种类型细胞都有毒性，包括动物、细菌和真菌[19]。

　　2.1 槲寄生毒肽的种类和特性

　　槲寄生毒肽中已鉴定一级序列的有12种，来源于欧洲槲寄生的有6种：VT A1、A2、A3、B1、PS、U-PS；中国槲寄生中分离了6种：VT B2、B3、B4、B5、B7、B8，各种槲寄生毒肽一级序列高度保守[1]。槲寄生毒肽对多种肿瘤细胞具有细胞毒活性，毒肽分子通过破坏细胞膜结构而产生细胞毒作用，其破坏细胞膜的机制可能是：通过静电力与膜磷脂酰丝氨酸头部结合，使膜变得僵硬，出现功能障碍。如果结合进一步增加则引起膜失稳定化，膜双分子层被破坏，导致膜内容物外漏[20]。

　　2.2 槲寄生毒肽抗肿瘤机制

　　2.2.1抑制细胞增殖孔景临等[21]用VT B2作用于大鼠成骨样肉瘤细胞，显示有明显抑制作用，其IC50为1.6mg/L。

　　2.2.2免役调节作用 Klein等[22]用槲寄生提取物治疗病人，在不同时间取血清做ELASE检测，发现产生了Ig型抗VT抗体,说明VT也具有免役调节作用。此外，Tabiasco 等[23]发现VT 还可以增强NK细胞介导的抗肿瘤作用。

　　3槲寄生生物碱的抗肿瘤作用

　　槲寄生生物碱是多种生物碱的混合物，因提取方法的不同而得到的生物碱所含种类不同。陈柏年等[24]报道用溶剂回流提取方法提取的槲寄生生物碱，经薄层层析显示至少含5种生物碱。而Park等[25]采用酸提碱沉有机溶剂萃取法提取的生物碱据色谱法分析显示韩槲寄生中至少含10种生物碱。现已证明槲寄生碱在体内外对肿瘤都有杀伤作用。

　　3.1 体内抗肿瘤作用陈世伟等[26]观察了槲寄生碱对小鼠实体瘤生长及瘤性腹水小鼠生存寿命的影响，与对照相比，能明显抑制肿瘤生长及延长小鼠寿命，有明显量效关系。

　　3.2 体外抗肿瘤作用彭海燕等[27]采用MTT法测定了槲寄生碱对食管癌、乳腺癌细胞生长的抑制作用，结果在0.031mg/ml-0.125mg/ml剂量时,对2种细胞的抑制率分别为39.8﹪-67.0﹪和47.7﹪-70.2﹪。

　　槲寄生碱虽已显示出显著的抗肿瘤作用，但其作用的机制尚未见报道，有待进一步研究。

　　近几年来，国外对槲寄生的研究和开发进展较快，欧洲槲寄生制剂已广泛用于临床并取得较好效果。专家预测槲寄生有望成为继紫杉醇之后又一种天然抗癌药物。我国槲寄生资源丰富，具有良好的开发前景。应用现代的药物和生物学技术，开发我国具有自主知识产权的药物，对促进我国中药现代化发展具有重要意义。

参考文献
[1]刘石磊,杜秀宝,孔景临等.槲寄生中多肽成分的结构鉴定与细胞毒活性研究[J].世界科学技术-中医药现代化★基础研究,2006,8(2):38-43
[2]李佩文.实用临床抗肿瘤中药(M).辽宁:辽宁科学技术出版社, 2001:132-133
[3]时文涛,徐旸,薛雅丽等..槲寄生（mistletoe）提取物—植物凝血素抗肿瘤作用的遗传学机制及其应用的研究概况[J].国外医学遗传学分册,2005，28(1)：21-24
[4] Blonski K,Schumacher U,Burkholder g of recombinant mistletoe lectin (viscumin-e) to resectedhuman adenocarcinoma of the lung[J]. Anticancer Res,2005,25(5):3303-3307
[5] Kovacs E,Link S,Toffol-Schmidt U. Cytostatic and cytostatic effect of mistletoe(Vidcum album L.) quercus extract Iscador[J].Arzneimittelforschung,2006,56(6A): 467-473
[6]傅炜昕,梁再赋,李铁英等.槲寄生凝集素对肿瘤细胞细胞周期的影响[J].沈阳药科大学学报,2005,
22(1):59-62
[7] Won-Ho Kim, Won Bong Park, Bin Gao. Critical Role of Reactive Oxygen Species and Mitochondrial
Membrane Potential in Korean Mistletoe Lectin-InducedApoptosis in Human Hepatocarcinoma Cells [J].Mol Pharmacol ,2004 ,66(6):1383–1396,
[8] Lavastre V,Chiasson S,Cavalli H. Viscum album agglutinin-1(VAA-1) induces apoptosis and degradation of cytoskeletal proteins in hman leukemia PLB-985 and X-CGD cells via caspases:lamin B1 is a novel target of VAA-1[J]. Leuk Res,2005,29(12):1443-1453
[9] Enesel MB,Acalovschi I,Grose V. Perioperative application of the viscum album extract cancer patients[J]. Anticancer Res,2005,25(6c):4583-4590
[10] Huber R,Classen K,Werner M et vitor immunoreactivity toward lectin-rich mistletoe (Vidcum album L.)extracts Iscador applied to health individuals[J]. Arzneimittelforschung,2006,56(6A):447-456
[11] Elluru S,Van huyen JP,Delignet S et al. Molecular mechanisms underlying the immunomodulatory effects of mistletoe(Vidcum album L.) extracts Iscador[J]. Arzneimittelforschung, 2006, 56(6A): 461-
466
[12] Van Huyen,Bayry J,Delignat S. Induction of apoptosis of endothelial cells by Viscum album: a role for anti-tumoral properties of mistletoe lectins[J].Mol Med,2002，8(10):600-206.
[13] Pryme IL,Bardocz S,Pusztai toe lectin supplementation and reduced growth of a murine non-Hodgkin lymphoma[J]. Histol Hisopathol,2002 ,17(1):261-271.
[14] Elsasser-Beile U,Leiber C,Weterauer U et nt intravesical treatment with a standardized mistletoe extract to prevent recurrence of superficial urinary bladder cancer[J]. Anticancer Res, 2005,25(6C):3733-3736
[15] Bantel H,Engels IH,Voelter W. Mistletoe lectin activates caspase-8/FLICE independently of death receptor signaling and enhances anticancer drug-induced apoptosis[J]. Cancer Res,1999 ,59(9):2083-
2090
[16] Choi SH,Lyu SY,Park WB .Mistletoe lectin induces apoptosis and telomerase inhibition in human A253 cancer cells through dephosphorylation of Akt[J].Arch Pharm Res,2004,27(1):68-76
[17] Lyu SY,Choi SH,Park mistletoe lectin induced apoptosis in hepatocarcinoma cells id associated with inhibition of telomerase via mitochondria controlled pathway independent of p53 [J].
Arch Pharm Res,2002,25(1):93-101
[18]刘石磊,杜秀宝,范崇旭等.槲寄生毒素研究进展[J].中草药,2006,37（4）：619-622
[19] Giudici M,Poveda JA,Molina ngal effects and mechanism of action of viscotoxin A3[J]. FEBS J, 2006,273(1):72-83
[20] Coulon A , Berkane E, Sautereau AM , Modes

of membrane interaction of a natural cysteine-rich
peptide: the viscotoxine A3 [J]. Biochim Biophys Acta,2002, 1559(2): 145-159
[21]孔景临,杜秀宝,范崇旭等.一种槲寄生多肽一级结构分析和抗肿瘤活性[J].药学学报,2004,39(10):
813-817
[22] Klein R,Classen K,Fischer S. Induction of antibodies to viscotoxins A1, A2, A3, and B in tumour patients during therapy with an aqueous mistletoe extracte[J].Eur Med Res,2002, 7(8):359-367
[23] Tabiasco J,Pont F,Fournie JJ. Mistletoe viscotoxins increase natural killer cell-mediated cytotoxicity
[J].Eur J Biochem,2002;269(10):2591-600.
[24]陈柏年,杨官娥,漆小梅等.槲寄生抗肿瘤有效成分研究进展[J].中国新药杂志,2005, 14 (10): 1131-
1136
[25] Park JH, Hyun CK, Shin HK. Cytotoxicity of heat-treated Korean mistletoe[J]. Cance. Lett,1998, 126(1)∶43-48
[26]陈世伟,李俊峰,胡家会等.槲寄生碱的提取纯化及抗肿瘤研究[J].山东中医药大学学报.2001, 25 (5):375-377
[27]彭海燕,章永红,韩英等.槲寄生碱抗肿瘤作用的研究[J].中国中药杂志.2005,30(5):381-382