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维吾尔族ATP结合盒转运子A1基因R219K多态性与冠心

发布时间:2015-07-07 10:49

【摘要】 目的:探讨atp结合盒转运子a1基因(atp binding cassette transporter 1,abca1)r219k多态性在新疆维吾尔族人群中的分布及其与冠心病(chd)的关系。方法:采用病例对照研究。用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(pcr-rflp)方法测定abca1基因多态性。结果:新疆维吾尔族abca1基因的多态性位点存在rr、rk、kk型三种基因型。冠心病组kk型基因频率、k等位基因频率低于对照组(p<0.05~<0.01)。k等位基因与冠心病的患病风险呈负相关,or值为0.640(95%ci 0.459~0.893),该等位基因可能为冠心病的保护因素。k等位基因携带者的高密度脂蛋白-胆固醇(hdl|c)水平高于rr基因型(p<0.05)。多因素logistic回归分析显示,性别、血清总胆固醇、吸烟、高血压、糖尿病为研究对象发生冠心病的独立危险因素。结论:研究显示k等位基因可能通过作用于血脂间接影响新疆维吾尔族冠心病的患病风险,但不是其免于发生冠心病的独立保护因素。

【关键词】 冠状动脉疾病;atp结合匣式转运子;基因;维吾尔族

abstract:objective:to study the distribution of r219k polymorphism in atpbinding cassette transporter 1 (abca1) gene in xinjiang uygur population and the association of this polymorphism with coronary heart disease (chd).methods:a casecontrol study was genotype and allele frequencies of abca1 r219k genetic variation were assayed by polymerase chain reaction|restricted fragments length polymorphism (pcr-rflp).results:abca1 gene r219k polymorphism was existing in uygur population, which had three types:rr genotype, rk genotype and kk ed with control group, the chd group had lower kk genotype frequency and lower k was significant difference between two groups (p<0.01,<0.05).k allele carriers had a decreased chd risk (odds ratio=0.640, 95% confidence interval:0.459~0.893).the level of hdl was higher in k allele carriers (kk+rk) than that of rr genotype carriers (p<0.05).it was shown sex, total cholesterol, smoke, hypertension and diabetes were independent factors for chd accidents by logistic sion:k allele had an indirect effect on decreased chd risk in xinjiang uygur population by decreasing the level of blood fat,but it seems to be not an independent factor.

author′s address:department of cardiology, the first affiliated hospital of xingjiang medical university, urumqi,xingjiang,830054,china

key words:coronary artery disease; atpbinding cassette transporter protein; gene; uygur rationality 近年来研究认为大多数的冠心病发病是个体遗传和环境因素相互作用的结果[1],遗传因素的作用更多地引起人们的重视。结合盒转运子a1(abca1)基因是一组利用atp为能量,在细胞间和细胞内转运底物的蛋白质。对abca1基因r219k位点多态性研究显示,其不同基因型影响着血脂水平,并在冠心病的发生发展中所起的作用亦有差异[2]。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2007年3月至2008年3月在新疆医科大学第一附属医院心内科住院的维吾尔族患者289例为观察对象。排除标准:合并周围血管疾病或周围血管栓塞性疾病、大动脉炎、血液病、结核、恶性肿瘤、严重肝肾功能不全、入院前三个月服用过降脂药物者。按冠状动脉造影结果分为两组:冠心病组:冠状动脉造影显示至少有一支血管狭窄程度≥50%,150例,男120例,女30例,年龄31~75,平均(53.47±10.12)岁;对照组:冠状动脉造影未发现可辨认斑块和狭窄,139例,其中男90例,女49例,年龄28~76,平均(51.14±11.46)岁。

1.2 方法 (1)abca1基因r219k多态性分析:采空腹静脉血5ml,乙二酸四乙酸(edta)抗凝,常规酚氯仿法提取外周白细胞基因组dna。引物设计参考国外有关文献[3],上游引物:5′-gtatttttgcaaggctaccag ttacatttgacaa-3′,下游引物:5′-gattggcttcaggatgtccatgttggaa-3′。聚合酶链式(pcr)反应体系为10 μl,含有基因组dna 0.2μg,上游和下游引物各5 pmol,2×pcr master 5 μl(含有3 mmol/l mgcl2、0.2 mmol/l脱氧核糖核苷三磷酸(dntp)、0.1u/μl嗜热水生菌(taq)酶和2×pcr缓冲液)及灭菌去离子水适量,应用自动循环仪进行扩增。扩增条件为:预变性95℃,5min,反应循环:变性95℃,40s、退火58℃,30s、延伸72℃,40s,循环35次;最后72℃延伸5min。限制性内切酶消化反应体系20μl:pcr产物10μl,xag i 5u,10×neb缓冲液2μl,灭菌去离子水补充体积至20μl,37℃过夜。3.0%琼脂糖凝胶电泳分离酶切产物,以50 bp dna ladder(标记物)作为dna片段的标准物;(2)血生化指标测定:测定血清总胆固醇(tc)、甘油三酯(tg)、高密度脂蛋白-胆固醇(hdl|c)、低密度脂蛋白-胆固醇(ldl|c)、脂蛋白(a)[lp(a)]。

1.3 统计学分析 用spss 13.0统计软件包进行统计分析。主要统计指标均进行正态性检验,正态分布的各统计指标均以(±s)表示。计量资料组间比较采用t检验,两组以上采用单因素方差分析检验,用最小显著差值方法进行两两比较。分类资料的组间比较采用x2检验。双侧p<0.05为差异有显著性。采用logistic回归模型判断冠心病危险因素作用的大小,分别计算各自的比值比(or)及其95%可信区间(ci),以or的95%ci不包含1为差异有显著性。

  2 结 果

2.1 一般临床资料和生化指标的比较 冠心病组与对照组在年龄分布上无差异(p>0.05),具有可比性。性别,吸烟史,高血压史,糖尿病史,tg,tc水平,冠心病组的均高于对照组的,hdl|c水平低于对照组,有显著差异(p<0.05或<0.01)(见表1)。

2.2 abca1基因r219k多态性位点基因型分析 用pcr方法将abca1基因扩增为一条177bp的目的片段,其中包含r219k基因多态性位点(见图1),当g变异为a时,k等位基因产生限制性内切酶xag i酶切位点,以xag i酶切pcr产物时,kk基因型全部被酶切,电泳图上表现为107bp、70bp两条片段;rr基因型不能被切开,电泳图上只有一条177bp的片段;rk基因型中,只有k等位基因被xag i酶切,电泳图上表现为177bp、107bp、70bp(见图2)。 表1 冠心病组与对照组一般临床资料和生化指标比较

  2.3 冠心病组与对照组abca1基因r219k基因型及等位基因频率的分布 对冠心病组和对照组的基因型分布进行了平衡检验,冠心病组:x2=0.212,p>0.05;对照组:x2=0.476,p>0.05,符合hardyweinberg遗传平衡,具有群体代表性。 冠心病组与对照组的abca1基因型分布及等位基因频率比较发现,冠心病组kk型分布明显低于对照组(x2=8.742,p=0.003)。冠心病组k等位基因频率显著低于对照组(x2=6.480,p=0.011)。kk基因型与冠心病呈负关联[or=0.394,95%ci(0.217,0.718)](p=0.003),k等位基因与冠心病呈负关联[or=0.640,95%ci(0.459,0.893)](p=0.011),见表2。表2 两组atp结合盒转运子a1(abca1)基因型及等位基因比较 注:与对照组比较△p<0.05,△△p<0.01。

  2.4 abca1不同基因型血脂比较 kk型的tc水平低于rr型,kk型、rk型的hdl|c水平高于rr型,差异均有显著性(p<0.05),见表3。

2.5 冠心病危险因素的logistic回归分析 通过logistic回归进行单变量分析,筛选研究对象冠心病的主要独立危险因素。结果显示,性别、tc、吸烟、高血压、糖尿病是本研究对象发生冠心病的独立危险因素(见表4),而abca1 r219k的k等位基因不是本研究对象发生冠心病的独立危险因素。

3 讨 论

  abca1基因突变引起丹吉尔病(td)和家族性hdl缺乏[4],其一些常见单核苷酸多态性(snp)也影响血脂水平、动脉粥样硬化的发生[5],在不同的人群中,研究结果有所不同。srinivasan[6]和evans[7]研究中未能显示abca1 r219k各基因型之间的tc、ldl|c、hdl|c、载脂蛋白(apo)b和apoa1水平存在明显差异,但显示在不同人群中,基因发生频率不同,在白种人群中k等位基因的频率为25%~26%,在黑种人群中为59.5%。frikke-schmidt[8]认为abca1基因r219k对hdl水平无明显影响。而王秀萍等[9]研究结果示abca1基因的kk基因型的hdl水平高于rr型患者,tg、hdlc、apoa1与基因型相关,r219k变异可能具有动脉硬化的保护作用,与部分国外报道[10]一致。r219k多态性研究已涉及脑动脉粥样硬化血栓形成疾病及男性肥胖等领域[11,12]。综合国内外研究结果可见,abca1基因的r219k多态性存在地域、种族、族别以及个体的差异,其作用涉及多种疾病,当前关注最多还是与血脂、冠心病的关系。 表3 各abca1基因型与血脂水平的比较表4 冠心病的logistic回归分析结果

  维吾尔族人群是一个相对隔离的群体,其生活方式和饮食习惯等较为一致,一定程度上减少了遗传异质性的影响,是研究遗传相关疾病的理想群体[13]。目前,尚未见abca1基因的r219k多态性在维吾尔族中的相关报道。本研究显示在维吾尔族研究对象中,abca1基因存在rr、rk、kk三种基因型。冠心病组kk型基因频率(13.3%)低于对照组(28.1%)。研究对象的abca1多态性与血清hdl|c水平相关,kk基因型hdl|c、tc水平高于rr基因型,产生有益的临床血脂谱。k等位基因与冠心病呈负关联,说明该等位基因可能是冠心病的保护因素,这与abca1 r219k变异携带者减轻动脉粥样硬化的严重程度,减少冠心病事件发生的研究结论一致[3]。多因素logistic回归分析显示,性别、tc、吸烟、高血压、糖尿病为本研究对象冠心病发生的独立危险因素。k等位基因可能通过作用于血脂,为冠心病发生的间接影响因素而不是独立保护因素。结果差异可能与样本的选择和abca1基因r219k多态性的种族、族别、地域差异有关。

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