用ELISA评价胶体金测试卡检测乙型肝炎病毒血清标

【摘要】 目的 用酶联免疫吸附法 (elisa)评价胶体金测试卡检测乙肝两对半的性能。方法 选用elisa检测乙肝表面抗原(hbsag)阴性100例,阳性者200例,用胶体金测试卡和elisa分别检测乙肝两对半对比结果和检测用时。结果 胶体金测试卡单个标本的检测时间为25min,而elisa的为1h。100例hbsag阴性标本除2例hbcab elisa检测阳性而胶体金测试卡检测阴性外,其他结果均相同。200例hbsag阳性标本中,胶体金测试卡法检测6例hbsag阴性,符合率97.0%;9例hbeab检测阴性,符合率92.9%;7例hbcab检测阴性,符合率96.5%。结论 胶体金测试卡与elisa相比,不需要特殊设备,易于观察结果,快速检测单个标本,操作简便,特异性较高,能满足急诊的需要。

【关键词】 乙肝两对半;胶体金测试卡;elisa

elisa evaluation of the performance of colloidal gold card in detecting hbv

　　chen hongan,men ziqi,wang yin,jiang wenjuan,emei sanitarium of chengdu military command,emeishan city,sichuan provinvce 614205

　　abstract objective to evaluate the performance of colloidal gold card in detecting hbv with s colloidal gold card and elisa were applied respectively to 100 cases with negative hbsag and 200 cases with positive hbsag detected out by elisa in detecting hbv,and analysis and evaluation were the detecting time for single sample was 25min by colloidal gold card and 1h by elisa; out of the 100 cases with negative hbsag,elisa detected out 2 cases with negative hbcab while colloidal gold card detected out all cases with negative hbcab,except this,the other results were the same; out of the 200 cases with positive hbsag,colloidal gold card detected out 6 cases of hbsag negative with the coincidence rate of 97.0%,9 cases of negative hbeab with the coincidence rate of 92.9%,7 cases of negative hbcab with the coincidence rate of 96.5%.conclusions comparing with elisa,colloidal gold card has such advantages as no need of special equipment,easy to observe the results,quick in the detection of single sample,simple to operate and high sensitive specificity,it can meet the need of emergent cases.

　　keywords hbv colloidal gold card elisa antigen-antibody system of hepatitis b

　　在我国人群中,乙型肝炎病毒(hbv)感染率一直较高,尤其是20世纪80年代中期以前出生的人,hbv感染率超过10%[1]。随着人们健康意识的增强,乙型肝炎病毒血清标志物两对半(以下简称两对半)检测已成为人们的日常体检、 门诊常规检查项目,做到对乙肝早诊断、早预防、早治疗,降低医院内交叉感染。目前实验室普遍采用的elisa检测,虽然其性能得到公认,但需要相应设备,检测时间长,操作较繁琐,不便单样本快速检测。胶体金测试卡不需要相应设备,但对其性能报道较少。因此,我们现将elisa检测hbsag阴性100例,阳性者200例,用胶体金测试卡和elisa分别检测乙肝两对半对比报告如下。

　　1 材料与方法

　　1.1 样本来源 来我院体检者,静脉采血,真空促凝剂分离胶管分离血清。收集elisa检测hbsag阳性标本200例,阴性标本100例,置于-20℃冰箱内备用。

　　1.2 试剂 胶体金测试卡采用广州万孚生物技术有限公司产品,批号为:w4080501c。elisa试剂盒购自上海科华生物工程有限公司,批号:20080317,均在有效期内。

　　1.3 仪器 sm～3型自动酶联免疫系统分析仪

　　1.4 方法及结果判断

　　1.4.1 胶体金测试卡采用免疫层析法,其中hbsag、hbeag采用双抗体夹心法,hbsab采用双抗原夹心法,hbeab、hbcab采用竞争抑制法,按说明书要求操作。阳性结果判断hbsag、hbsab、hbeag测试卡的试纸条分别出现检测线和质控线,hbeab、hbcab测试卡的试纸条只出现质控线,测试卡未出现质控线为失效。分时统计结果显示时间。

　　1.4.2 elisa所有标本均用sm-3型自动酶联免疫系统分析仪检测。hbsag、hbsab、hbeag样本od值s/co≥1为阳性,反之为阴性;hbeab、hbcab样本od值s/co≥1为阴性,反之为阳性。

　　2 结 果

　　2.1 统计胶体金测试卡检测标本显示结果的时间,10min 174例,15min 63例,20min 51例,25min 12例,超过25min(试剂盒要求25min报告结果)结果做无效处理。elisa检测单个标本需1h。

　　2.2 100例hbsag阴性标本中,2例hbcab胶体金测试卡检测阴性,患者于60d复查,2例hbcab结果均为阳性。其他结果均相同。结果见表1。表1 100例hbsag阴性标本两法检测结果

　　2.3 200例hbsag阳性中,胶体金测试卡检测6例hbsag阴性,符合率97.0%,患者于60d复查,结果hbsag均为阳性。 胶体金测试卡检测hbsab、hbeag的符合率为100%,9例hbeab阴性,符合率92.9%,7例hbcab阴性,符合率96.5%。结果见表2。表2 200例hbsag阳性标本两种方法检测结果

　　3 讨 论

　　本实验胶体金测试卡所用检测时间比焦玉东[2]报道的hbsag胶体金试纸条30min内显示结果缩短了5min,这是试剂盒差异造成的。胶体金测试卡检测单个标本的时间明显比elisa时间短,因为高浓度的抗体(或抗原)集中固定在纤维素的微孔中,待测抗原(或抗体)流经微孔与固定的抗体(或抗原)接触,很快完成反应,通过目测胶体金标记物得到直观的显色效果。elisa检测抗原(或抗体)在液相中经扩散作用,逐渐与固相表面的抗体(或抗原)结合,同时标记抗体(或抗原)也需要此过程形成标记抗原抗体复合物,检测时间较长。胶体金测试卡成本高;elisa成本比较低。胶体金测试卡不需要仪器设备和洗涤,易于操作,大大减少了污染机会;elisa需洗涤和显色反应过程,中间环节多,较复杂。

　　从表1结果表明胶体金测试卡的特异性较好。出现差异的患者复查结果表明胶体金测试卡检测存在一定的假阴性,敏感性和稳定性不如elisa。sxsym系统elisa检测hbsag时,s/co值从1.27到250.59均呈线性,相应的hbsag浓度范围为0.031～400.0ng/ml[3]。检测乙肝两对半,胶体金测试卡只是定性筛选;elisa可用定值血清确定其浓度。由于胶体金测试卡检测结果判定是比较检测线和控制线颜色,当检测线颜色较弱,肉眼难以判定,造成其检测的假阴性增多。

　　胶体金测试卡法不需要特殊设备,快速检测单个标本,易于观察结果,操作简便,特异性较高,能满足急诊的需要。但从实验结果表明,由于胶体金测试卡的原理及方法学差异,灵敏度和稳定性稍低于elisa,线性范围也较窄;hbcab、hbeab和hbcab试剂质量有待提高,不适于住院病人和献血员[4],特别手术病人的检测。胶体金测试卡成本高于elisa,不适合批量标本检测。因此,实验室应根据需要,结合工作情况选用实验方法。

【参考文献】
　　[1] 李金明.乙型肝炎病毒血清标志物测定及结果解释的若干问题[j].中华检验医学杂志,2006,29(5):385～389.

　　[2] 焦玉东.胶体金试纸条检测7628份献血者hbsag假阴性分析[j].临床检验杂志,2004,22(6):468.

　　[3] 王 蕾,许 静,高 锋.测定乙型肝炎病毒表面抗原s/co值的临床应用评价[j].上海医学检验杂志,2003,18(5): 288～290.