穿山甲与猪蹄甲的化学成分比较

【摘要】 　　目的对穿山甲（i）和猪蹄甲（ii）的成分进行比较。方法用薄层层析法、紫外分光光度法，氨基酸分析仪对i、ii水解液、水提液及醇提液的成分及氨基酸进行测定比较。结果①两者水提液、醇提液的薄层斑点颜色和rf 值相同；②紫外吸收峰峰形基本一致；③所含氨基酸一致，除个别氨基酸含量差异明显，其它氨基酸含量接近。结论猪蹄甲和穿山甲的提取物中所含成分相似且含量接近，这为猪蹄甲代替穿山甲药用提供了理论依据。

【关键词】 穿山甲 猪蹄甲 薄层层析 紫外分光光度法 氨基酸

穿山甲的鳞甲，临床用于 治疗 痈疽疮肿、风寒湿痹、月经停闭、乳汁不通，外用止血［1］，并有明显的抗肿瘤作用，用于妇科卵巢肿瘤效果显著［2］；猪蹄甲临床用于治疗痔疮、疽咳嗽喘息及通乳、补血等［3］。此外，民间有将猪蹄甲煅成炭后口服以治疗功能性子宫出血症的［4］用法。

穿山甲是国家二级保护动物，其鳞甲为常用的贵重中药材。由于用量不断增大，野生资源已临灭绝，市场供需矛盾非常突出，因而，很有必要寻找新资源予以代用。据临床报道，猪蹄甲可代替穿山甲［5，6］使用，《本草纲目》记载了穿山甲与猪蹄甲作用疗效有相同之处，均可治痈疽、恶疮、痔漏、除痰化痰等。本文对穿山甲和猪蹄甲的水和70%乙醇提取物进行了薄层、紫外线及氨基酸含量等的分析，结果发现，两种提取物斑点颜色和rf值基本相同；此外吸收峰形基本一致，含氨基酸的类型及含量也基本相同。现报道如下。

　 　1 材料及仪器

穿山甲（已炮制，购于南昌中药切制厂），猪蹄甲（已炮制，购于南昌肉类加工厂）。仪器：三用紫外线分析仪（海顾村电光仪器厂），日立835-50型氨基酸自动分析仪，721型可见分光光度计（上海第三分析仪器厂）。所有试剂均为a.r级。

　 　2 方法与结果

　　2.1 检测液的制备

　　2.1.1 水解液的制备

　　称取穿山甲（i）粉末50.0 g，加入6 mol/l的hcl 250 ml，回流48 h［7］，将水解液置于水浴上加热挥去hcl，取出加入活性炭，趁热抽滤，浓缩，定容，摇匀，灌装，密封，高温灭菌，备用。

称取猪蹄甲（ii）粉末50.0 g，加入6 mol/l的hcl 250 ml，同穿山甲水解液的制备，得猪蹄甲水解液。

　　2.1.2 醇提液的制备

　　称取i粉末30.0 g，加入70%乙醇240 ml［8］，回流1 h，趁热抽滤，滤液浓缩到一定量，定容（50 ml），摇匀，灌装，备用。

称取ii粉末30.0 g，照上法制得醇提液。

　　2.1.3 水提液的制备

　　称取i粉末20.0 g加入蒸馏水200 ml，煎煮1 h，抽滤，滤渣中再加蒸馏水200 ml，煎煮1 h，抽滤，合并两次滤液，浓缩，定容，摇匀灌装，密封后高温来灭菌，备用。

称取ii粉末20.0 g，照上法制得水提液。

　　2.2 薄层分析

　　2.2.1 层析板的制备玻璃规格

　　厚2 mm左右，光滑清洁，2 cm×10 cm或4 cm×20 cm。

铺板：硅胶g300 g，加入0.7%cmc-na上清液60 ml，研钵中研成均匀糊状，立即铺层，凉干，105℃活化1 h，干燥器中备用。

　　2.2.2 点样液的制备

　　将以上i、ii醇提液、水提液各取40 ml浓缩至10 ml，装入小锥形瓶中塞紧备用，水提液置冰箱中保存。

　　2.2.3 点样

　　分别用微量进样器取上述i、ii醇提液的浓缩制品15 ml，点样于硅胶g板上，分别以a、b、c 3种不同溶剂系统展开［8］，结果见图1～3。

a溶剂系统：

展开剂 正丁醇（水饱和液）∶无水乙醇 （3∶1）

显示剂 5%茚三酮无水乙醇液

各点rf值

1i=0.147 1ii=0.147

2i=0.224 2ii=0.224

3i=0.345 3ii=0.349

4i=0.457 4ii=0.448

5i=0.741 5ii=0.716

6ii点为绿色，其它各荧光点均为淡紫色。

b溶剂系统：

展开剂 正丁醇∶乙醇∶nh3·h2o（4∶1∶1）

显色剂 5%茚三酮无水醇液

各点rf值：

1i=0.0822 1ii=0.0822

2i=0.219 2ii=0.218

3i=0.279 3ii=0.283

4i=0.627 4ii=0.630

5i=0.977 5ii=0.977

5i、5ii、6ii为紫色点，其它各荧光点均为黄绿色。
　
由以上数据可看出，i、ii醇提液或水提液在不同溶剂系统下展开后，其相应各点rf 值基本相同，荧光点的颜色也基本一致，说明二者成分基本相同。在上述两种提取液的薄层层析中，有一明显现象是ii 的斑点颜色和荧光点亮度均深于i的斑点，因在同一浓度下，说明ii含有的成分量可能高于i。
　
　　2.3 紫外分析分别取i、ii的醇提物和水提物于721型可分光光度计中，在不同波长处测其吸收度a，醇提物以70%乙醇为空白，水提物以蒸馏水为空白，结果醇提物无吸收，水提物结果如图6～7。
　
上图可看出i、ii水提液在400 nm左右都有强吸收峰，二者波形相似，说明i、ii含的成分相近。在两次测量中，aiimax-aimax（最大吸收处a的差）基本相等且左右图峰相似，说明i、ii水提物最大吸收受时间影响不大，水提的方法得到的组分稳定性较好。

　　2.4 氨基酸含量的测定将i水解液（0.2 g/ml），水提液（0.4 g/ml），醇提液（0.6 g/ml）；ii水提液（0.2 g/ml），水提液（0.4 g/ml），醇提液（0.6 g/ml）共6种样品取出一定量，用日立835-50型氨基酸自动分析仪测出其含游离氨基酸的量（浙江医学 科学 院食品研究所测）。结果见表1～2。表1 必需氨基酸含量比较（略）表2 非必需氨基酸含量比较（略）

由表1～2可以看出ii水解液中必需氨基酸总量高于i水解液的必需氨基酸总量；i、ii水解液中天氨酸、苏氨酸、丝氨酸、赖氨酸等含量基本相同，其它各种氨基酸含量也十分接近；所测的7种必需氨基酸中有5种的含量基本一致，说明i、ii含有相似的肽类或蛋白质且含量相近。i、ii水提液和醇提液中，各类氨基酸相对应的含量接近；必需氨基酸总量水提液中ii i。表中数据还可看出，水提方法所得的i、ii的氨基酸总量远远高于70%乙醇提取液中的氨基酸总量。

　 　3 讨论

在tlc、uv以及氨基酸检测中皆显示i、ii两种供试液的成分基本相同，这为猪蹄甲代替穿山甲药用提供了一定的理论依据［10］。
由氨基酸的测定结果可得，i、ii水提液中氨基酸含量均高于它们各自醇提液，说明水提效率高于醇提，这为在提取工艺中选择合适的溶剂提供了一定的 参考 。

　　在后续的工作中，我们将采用其他一系列的分析方法对穿山甲和猪蹄甲的成分作更深入全面的分析比较。

【参考 文献 】
　　［1］江苏新医学院．中药大辞典［m］．上海：上海科学技术出版社,1977：1728，3549.

　　［2］敖保世．穿山甲散 治疗 卵巢肿瘤8例报告［j］．江西中医药， 1981，31(3)：35.

　　［3］杨立权，迟 程． 穿山甲的研究概况与展望［j］．云南中医学院学报，1994，17（4）：46.

　　［4］赵宜红,李寅超．猪蹄甲、穿山甲的消痈作用［j］．中医研究,2001,14(6):60.

　　［5］付 丽．浅谈猪蹄甲与穿山甲的炮制方法［j］．内蒙古药学，1985,(1)：44.

　　［6］边振考,胡春光,吕晓顺．猪蹄甲用于催乳的研究［j］．