老年咳喘片中淫羊藿苷的含量测定

作者：王霆 张丹 梁生旺 王淑美 申洪超

【摘要】 目的 测定老年咳喘片中淫羊藿苷的含量。方法 采用高效液相法，色谱柱用kromasil c18柱,以乙腈水(体积比20∶80)为流动相，检测波长为270 nm。结果 淫羊藿苷在6.91～55.28 μg/ml范围内与峰面积积分值线性关系良好,r=0.999 9；平均加样回收率为98.32%,rsd为1.20%。结论 本法操作简便,结果可靠,重现性好,可作为该产品质量控制的方法。

【关键词】 老年咳喘片 淫羊藿苷 高效液相色谱法

老年咳喘片由黄芪、白术、防风、甘草等七味中药组成，具有滋阴壮阳、扶正固本之功能，并能提高免疫能力、促进病体康复,用于 治疗 老年慢性支气管炎及各种体虚症。方中淫羊藿具有补肾阳、强筋骨、祛风湿、提高机体免疫力的功效，与本品功能主治一致。因此本文以老年咳喘片中淫羊藿的主要成分淫羊藿苷为指标，建立其质量标准的定量检测方法。

　　1 仪器与试药

　　1.1 仪器

　　安捷伦1100高效液相色谱仪（vwd检测器，agilent 1100化学工作站）；kq100型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；bszz4s型 电子 分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）。

　　1.2 试药

　　乙腈为色谱纯，水为纯净水，其余试剂均为分析纯。补骨脂、黄芪、甘草等药材均购自郑州仟僖堂药材公司东明路店，经河南中医学院药学院生药学科陈随清博士鉴定所购药材补骨脂为豆科植物补骨脂psoralea corylifolia l.的干燥成熟果实；黄芪为豆科植物膜荚黄芪astragalus membranaceus (fisch.) bge.的干燥根；甘草为豆科植物甘草glycyrrhiza uralensis fisch.;白术为菊科植物白术atractylodes macrocephala koidz.的干燥根茎。淫羊藿苷对照品（批号：110737200312， 中国 药品生物制品检定所）,老年咳喘片（自制，批号：070214、070215、070216）。

　　2 方法与结果

　　2.1 色谱条件

　　色谱柱: kromasil c18(4.6 mm×250 mm, 5 μm);流动相:乙腈水(体积比20∶80);检测波长为270 nm［1］;流速为1. 0 ml/min;柱温为30 ℃;进样量为10 μl。

　　2.2 溶液的制备

　　2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取淫羊藿苷对照品适量,加甲醇制成每1 ml含30 μg的溶液,即得。

　　2.2.2 供试品溶液的制备 取本品20片，精密称定，研细，取约1.0 g,精密称定，置50 ml具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25 ml，密塞，称定重量，超声处理1 h，取出，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀, 滤过，取续滤液，即得［2］。

　　2.2.3 缺淫羊藿的阴性对照溶液的制备 依据处方中的比例，按制法制备缺淫羊藿的阴性对照样品，按“2.2.2”项方法制备阴性对照溶液。

　　2.3 系统适用性试验

　　分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各10 μl，注入液相色谱仪中测定。结果淫羊藿苷在20 min内出峰，而且与前后的峰均有较好的分离，理论板数以士的宁 计算 应不低于3 000,见图1。阴性样品不干扰样品测定［3］,见图1。

　　a.对照品;b.供试品;c.阴性对照

　　图1 hplc图（略）

　　figure 1 hplc chromatogram

　　2.4 线性关系的考察

　　精密称取淫羊藿苷对照品，分别制成6.91、13. 82、27.64、41.46、55.28 μg/ml 5个不同质量浓度的对照品溶液，分别吸取10 μl进样，测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，淫羊藿苷的进样质量浓度为横坐标绘制标准曲线，得回归方程y=13. 94805x＋4. 06166,r=0.999 9，结果表明淫羊藿苷在6.91～55. 28 μg/ml之间与峰面积积分值呈良好的线性关系。

　　2.5 精密度试验

　　取同一对照品溶液，按“2.1”项色谱条件重复进样6次，进样量10 μl，测定淫羊藿苷峰面积，结果其rsd值为0.18％。

　　2.6 重现性试验

　　取同一样品（批号：070214），按“2.2.2”项方法制备6份供试液， 分别进样测定， 计算 求得平均含量为0.236 mg/片，其rsd值为1. 35％。

　　2.7 稳定性试验

　　取同一样品（批号：070215），按“2.2.2”项方法制备供试液，分别在0、2、4、6、8 h测定淫羊藿苷峰面积，结果其rsd值为0.27％，表明样品在8 h内稳定。

　　2.8 加样回收率试验

　　取已知含量同一批号供试品（批号：070215，淫羊藿苷含量：0.246 8 mg/片）20片，精密称定重量6. 258 4 g，平均片重0.312 9 g/片，研细，精密称取0.5 g，取6份，分别加入淫羊藿苷对照品适量，按“2. 2. 2”项方法制备供试液，进样量10 μl，测定淫羊藿苷峰面积，计算淫羊藿苷含量和回收率，结果见表1。

　　表1 淫羊藿苷加样回收率试验（略）

　　table 1 recovery of icariin

　　2.9 样品测定

　　取3批样品按“2.2.2”项方法制备供试液，并进行含量测定，测定结果见表2。

　　表2 样品测定结果（略）

　　table 2 icariin content in the sample

　　3 讨论

　　3.1 比较了甲醇水、乙腈水2个溶剂系统对样品淫羊藿苷分离度的影响［4,5］，结果发现采用乙腈水（体积比20∶80）系统洗脱时，淫羊藿苷能得到良好的分离。

　　3.2 应用hplc法对方中淫羊藿中有效成分淫羊藿苷的含量进行了测定,灵敏度、准确度高，专属性强，重现性好，可作为质量控制方法。

【 参考 文献 】
　　［1］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典:2005年版一部［s］.北京：化学 工业 出版社，2005：245.

　　［2］ 陈友爱,林晓.高效液相色谱法测定解心痛片中淫羊藿苷的含量［j］.海峡药学, 2007,19 (10):36-38.

　　［3］ 钟涧.高效液相色谱法测定龟鹿补肾胶囊中淫羊藿苷的含量［j］.广东药学院学报，2004，20（6）：625-626.

　　［4］ 王慕邹.常用中草药高效液相色谱分析［m］.北京： 科学 出版社,1999.

　　［5］ 马新飞,殷放宙.hplc测定仙灵骨葆片中淫羊藿苷的含量［j］.中华中医药学刊，2007，25（10）：2194-2195.